^

Sağlık

Mezenkimal kök hücreler

, Tıbbi editör
Son inceleme: 23.04.2024
Fact-checked
х

Tüm iLive içeriği tıbbi olarak incelenir veya mümkün olduğu kadar gerçek doğruluğu sağlamak için kontrol edilir.

Sıkı kaynak bulma kurallarımız var ve yalnızca saygın medya sitelerine, akademik araştırma kurumlarına ve mümkün olduğunda tıbbi olarak meslektaş gözden geçirme çalışmalarına bağlanıyoruz. Parantez içindeki sayıların ([1], [2], vb.) Bu çalışmalara tıklanabilir bağlantılar olduğunu unutmayın.

İçeriğimizin herhangi birinin yanlış, güncel değil veya başka türlü sorgulanabilir olduğunu düşünüyorsanız, lütfen onu seçin ve Ctrl + Enter tuşlarına basın.

Bölgesel kök hücreler arasında, mezenkimal kök hücreler (MSC'ler), insan vücudunun tüm organlarının ve dokularının stromal matrisini oluşturan türevleri özel bir yer işgal eder. MSC araştırmasında öncelik, Rus biyolojik biliminin temsilcilerine aittir.

Geçtiğimiz yüzyılın ortalarında, çok-noktalı stromal kemik iliği kök hücrelerinin homojen bir kültürü ilk olarak A. Friedenshtein laboratuarında izole edilmiştir. Uzun bir süre için, bir alt-tabakaya bağlanmış mezenşimal sap hücreleri, fagositik aktivitesi olan fibroblast hücre klonlarının oluşturulmuş bir alt-tabaka üzerine sabitlendikten sonra düşük tohumlama yoğunluğunda yüksek proliferasyon oranına ve kültürleri korudu. MSC proliferasyonunun durması, kemik, yağ, kıkırdak, kas veya bağ doku hücrelerine kendiliğinden in vitro farklılaşmalarıyla sonlandırıldı. Daha ileri çalışmalar, çeşitli memeli türlerinin kemik iliği stromasının fibroblast benzeri hücrelerinin ve aynı zamanda koloni oluşturan aktivitelerinin osteojenik potansiyelinin oluşturulmasını mümkün kılmıştır. In vivo deneylerde, fibroblast koloni oluşturucu hücrenin her iki hetero ve ortotopik transplantasyon kemik, kıkırdak ve lifli yağ dokusunun oluşturulması tamamlandı olduğu gösterilmiştir. Kemik iliği kök hücreleri, kendi kendine yenilenme ve tek bir hücre hattı içinde çeşitli farklılaşma için yüksek kapasiteye sahip olduklarından, multipotent mezenkimal progenitör hücreler olarak adlandırılmıştır.

Mezenkimal kök hücrelerin 45 yıllık temel araştırmasında, klinik uygulamalarında türevlerinin kullanımı için gerçek koşulların yaratıldığı belirtilmelidir.

Bugün, insan vücudunun tüm dokularının, çoğalma, göç, farklılaşma ve olgunlaşma süreçlerinin bir sonucu olarak farklı hücre çizgilerinin kök hücrelerinden oluştuğu şüphesizdir. Bununla birlikte, daha yakın bir zamanda, yetişkin vücudundaki kök hücrelerin dokuya özgü olduğuna, yani, içinde bulundukları dokuların sadece özel hücre çizgilerini üretebildiğine inanılmaktadır. Bu kavramsal durum, hematopoietik kök hücrelerin sadece periferik kanın hücresel elemanlarına değil, aynı zamanda oval karaciğer hücrelerine dönüşümü olguları tarafından reddedilmiştir. Ek olarak, ve nöral kök hücreler hem hematopoietik progenitör hücrelerin erken işlenmiş hatlarının yanı sıra hem nöronlara hem de glial elementlere neden olabilirler. Buna karşılık, genellikle kemik, kıkırdak ve adipoz doku hücresel elemanları üreten mezenkimal kök hücreler, nöral kök hücrelere dönüşebilir. Büyüme, fizyolojik ve onarıcı doku rejenerasyonu sürecinde, dokuya spesifik olmayan kök rezervlerinden, bağlanmamış progenitör hücrelerin üretildiği varsayılmaktadır. Örneğin, kas dokusu onarımı kemik iliğinden iskelet kaslarına göç eden mezenşimal kök hücreler vasıtasıyla gerçekleştirilebilir.

Bu çapraz değiştirilebilirliği kök hücreleri tüm araştırmacılar tanır, ancak hücre transplantasyonu genetik bilginin hücre vektörü için bir kaynak olarak mezenkimal kök hücrelerin klinik kullanım imkanı izole etmek nispeten kolay ve yaymak çok potansiyelli stromal kemik iliği kök hücreleri gibi tartışmalı henüz in vitro kültürde. Aynı zamanda, bilimsel literatürde, kemik iliği stromasının kök hücrelerinde potansiyel pluripotens raporları olmaya devam etmektedir. MSC transdiferansye özel uyarıcılarının etkisi altında sinir hücreleri, kardiyomiyositlerde ve hepatositlerde dönüştürülür kanıtlar sunulmuştur protokolleri araştırma olarak. Bununla birlikte, bazı bilim insanlarında genlerin yeniden aktivasyonu ve ekspresyonunun erken embriyogenez olasılığı oldukça tartışmalıdır. Aynı zamanda, herkes koşulları rejeneratif tıp ve plastik ESC'lennin pluripotentlığını için multipotent mezenkimal kök hücreleri genişletmek için bulunursa otomatik etik, ahlaki, dini ve hukuki nitelikteki pek çok sorun çözülmüş olduğunu anlar. Bu durumda, hastanın kök rejeneratif kapasitesinin kaynağı otolog stromal hücreler vardır Bundan başka, çözülebilir ve hücre naklinin imün reddinin problemdir. Bu beklentiler ne kadar gerçektir, yakın gelecek gösterecektir.

trusted-source[1], [2]

Mezenkimal kök hücrelerin tıpta kullanımı

Mezenkimal kök hücrelerin türevlerinin klinik kullanımı için esas olarak deri geniş ve derin termal lezyonlar nedeniyle doku defektlerinin azalma ile ilişkilidir. Derin yanıkların tedavisinde allojenik fibroblast benzeri mezenkimal kök hücrelerin uygunluğunun preklinik değerlendirme yapıldı. Fibroblast-benzeri kemik iliği kök hücreleri, mezenkimal mümkün derin yanık yaraları rejenerasyonunu optimize etmek için onları nakli kolaylaştırır kültür, bir mono-katman oluşturmak gösterilmiştir. Araştırmacı benzer özellikler embriyonik fibroblastlar var unutmayın, ancak ikincisi klinik uygulama mevcut etik ve hukuki sorunlar ile sınırlıdır. Wistar sıçanlarında cildin tüm katmanlarına zarar veren derin bir termal yanık modellenmiştir. Yanık alanı, cildin toplam yüzeyinin% 18-20'sidir. Birinci deney grubunda derin termal yaralanma ve allojenik fibroblasttan türetilmiş mezenkimal kök hücre transplantasyonu ile fareden oluşturuldu. İkinci grup derin termal yanıklar ve allojeneik embriyonik fibroblastlar trans-ekimi ile hayvanlardan oluştu. Üçüncü grup, hücresel tedaviyi gerçekleştirmeyen derin bir termal yanma ile kontrol sıçanları tarafından temsil edildi. Fibroblast türevli mezenkimal kök hücreler ve embriyonik fibroblastlar içinde bir 2 x 10 kadar bir miktarda pipetle bir yanık yara yüzeyine uygulandı 4 yanık modelleme ve oluşan nekrotik eskar eksizyonu sonra 2. Günde hücreler. Transplantasyon sonrası, hücreler, gentamisin ile izotonik sodyum klorür çözeltisi içinde ıslatılmış sargı bezi ile kaplı yüzeyin yakmak. Çit kemik iliği hücreleri uyluk kemiklerinden Wistar farelerinde üretilir mezenkimal kök hücreler fibroblast hattına daha sonra indüksiyon ile MSC elde edildi. Embriyonik fibroblastlar 14-17 günlük embriyoların akciğerlerinden elde edildi. Embriyonik fibroblastlar ve kemik iliği hücreleri, bir ön-MSC% 95 nem,% 5 CO2 içeren bir atmosferde, bir C02 iikubatore 37 ° C 'de Petri tabaklarında kültürlenmiştir elde edildi. Tek tabaka oluşumu için MSC 14, 17 gün arasında gerekli ise Embriyonik fibroblastlar, 4-6 gün süre ile kültüre edilir. Daha sonra MSC 4 gün çözündürme ve kültüre MSC ile hazırlanmıştır fibroblasttan türetilmiş mezenkimal kök hücreler için bir başlangıç malzemesi olarak dondurarak saklama tarafından yapılmaktadır. Fibroblast oluşturulan mezenkimal kök hücrelerin sayısı, aynı kültür periyodu boyunca ortaya çıkan embriyonik fibroblastlar 3 kat daha fazla bir sayıdır. Transtslantirovannyh hücreler genom, bir rekombinant adenovirüs V tipi taşıyıcı 1AS-2 gen kodlama beta-galaktosidaz, E. Coli dayanarak virüs mekik vektörü kullanılarak etiketli kültür aşamasında yanık yaraları tespit etmek. çeşitli zamanlarda Yaşayan hücreler naklinden sonra, karakteristik mavimsi yeşil bir renk elde ilave substrat X-Gal ile cryosections immünohistokimyasal olarak tespit edildi. Görsel dinamik, Planimetrik ve yanık yaralarının histolojik değerlendirme durumunun bir sonucu olarak, hatta izole gruplar halinde hücrelerin naklinden sonra 3. Günde yara iyileşmesi sürecinde sırasında önemli farklılıklar görünür bulunmuştur. Özellikle farklı olan bu fark, hücre transplantasyonundan sonraki 7. Günde oldu. Fibroblast benzeri mezenkimal kök hücreleri transplante edildi birinci grup, hayvanlar, yara kendi büyüklüğü azalır granülasyon dokusu epidermis seviyesine kendi alanının tamamı üzerinde büyüme, eşit pembe yoğun bir renk aldı ve bir yüzey yakmak. Çeşitli yara yüzeyine ince kollajen filmi kurdu, ama o yanık alanın tamamını kapsayacak şekilde devam etti. Embriyonik fibroblastlar transplante edildi, ikinci grup, hayvanlar, granülasyon dokusu yara kenarlarının epidermis seviyesine kaldırıldığında ancak bazı yerlerde, yaradan aynı zamanda plazmoreya grup 1'de daha yoğun, ve başlangıçta oluşan kolajen film, hemen hemen yok oldu. 7. Gün ve yanık üzerine, kök hücre tedavisi almayan hayvanlarda fibrin ile kaplanmış bir soluk çukurlu nekrotik doku olmuştur. Yanma yüzeyi boyunca plazmor görülmüştür. Histolojik olarak 1. Ve 2. Grupların hayvanlar hücresel infiltrasyon ve damar sisteminin gelişiminde bir azalma gösterdi, yeni başlayan yenileyici sürecinin bu işaretler Grup 1'de sıçanlarda daha şiddetli olmuştur. Kontrol grubunda, mevcut yeni oluşan kan damarlarının histolojik hücre yara infiltrasyonu belirtileri gösterdi. Gözlem 15-30 inci günü 1 grup yanık yüzey alanının hayvanlar diğer grupların sıçanlarda önemli ölçüde daha küçük ve granül hale getirme yüzeyi daha gelişmiş oldu. 2. Grup yanık yüzey alanının hayvanlarda da marjinal epitelizasyon nedeniyle farelerin, kontrol grubunda ise yanık yaralarının boyutu ile karşılaştırıldığında azalır. Kontrol grubunda yanık yüzey siteleri, adacıklar fibrinöze plak yanık yüzeyi boyunca ılımlı plazmoreya devam edildi, örümcek damarlar burada görüntülenen nadir ile kalmıştır zor ayrılabilir kabuğu bir şey soluk tanelemeler kalmıştır. Genel olarak, Grup 3 hayvanlanna da yaranın büyüklüğü azaltır, ancak yara podrytymi kenar kalmıştır.

Bu nedenle, hücre terapisi kullanımı fibroblasttan türetilmiş mezenkimal kök hücre ve embriyonik fibroblastlar nakli sonucu yanma yüzeyinin iyileşme ivme işaretli fibroblasttan türetilmiş mezenkimal kök hücreleri ve fetal fibroblastlar kullanılarak yara iyileşme oranları karşılaştırmalı bir çalışma sırasında ve olmadan. Bununla birlikte, iyileşme hızının fibroblast yara allojenik kemik iliği hücrelerinden kullanılması durumunda embriyonik fibroblastlar nakli daha yüksekti. Bu işlemin yenilenmesi fazlarının değişimi hızlandırma tezahür edilmiş - hücre infiltrasyonu sürelerini azaltmak için, vasküler ağların proliferasyonun oranının yanı sıra granülasyon dokusunun oluşumunu arttırır.

Dinamik planimetrinin sonuçları, yanık yarasının spontan iyileşme oranının (hücre tedavisi kullanılmadan) en düşük olduğunu göstermektedir. Iyileşme hızının fibroblast yara allojenik mezenkimal kök hücre transplantasyonundan sonra, 15. Ve 30. Günde embriyonik fibroblastlar nakli daha yüksekti. Beta-galaktosidaz saptanması için histokimyasal yöntem fibroblast benzeri mezenkimal kök hücreleri ve yüzey üzerinde gözlem tüm süre boyunca embriyonik fibroblastlar ve derin rejenere yaralar nakledilen hücrelerin nakli sonrası canlı kalır göstermiştir. Yazarlar yanık yaraları rejenerasyon daha yüksek bir oran biyoaktif faktörlere rostostimuliruyushih olgunlaşma sırasında bu hücreler tarafından fibroblast şartlandırılmış salımının mezenkimal kök hücreleri kullanılarak düşündürmektedir.

Yanık yaralarının tedavisi için otolog veya allojenik keratinositler ve allojenik fibroblastların Transplantasyon ve klinikte kullanılan. Kapsamlı derin yanığı olan çocukların cerrahi tedavi infüzyon medya kullanılan farklı reaksiyonlar üzerinde nedeniyle travma ve cerrahi müdahaleler, önemli kan kaybının yüksek çokluğu için karmaşık bir görev olduğunu belirtmek gerekir. Kapsamlı derin yanıklar ile deri ve plastik cerrahi uygulanmasında temel zorluklar, alan dolayı onun durumun ciddiyetine ve donör cilt kaynakların yetersizliği, vücut yüzeyinin% 40'ını aşan. Büyük perforasyon oranı ile örgü greft kullanımı epiteliziruyutsya hücre perforasyon sonra görüntü oldukça yavaş olmasından dolayı, sorunu çözmek ve genellikle deri greftleri lize olmuş veya kuru olarak yapmaz. Bu tür kaplamalar ksenokozha olarak yaralar, kadavra alograftlan yanık, sentetik film kaplamaları her zaman yeteri kadar etkili değildir, bu nedenle kültürlü keratinositler ve fibroblastların yanık yüzey tabakalarının kapatılması için yeni yöntemlerin geliştirilmesi. Özel olarak, transplantasyon esnasında temin kültürlenmiş allofibroblastov kullanarak yanık yüzeyleri kapatılması için bir yöntem yanıklar yara sınırı korunmuş çoğalma epidermotsitov üzerinde uyarıcı bir etkisi belirgin ve keratinositlerde greft ağ-örgü. Budkevich L. Ve arkadaşları (2000) 'de çocuklarda yanıkların tedavisi için bu yöntemi uygulamak sonuçlarını göstermektedir. Termal travma geçirmiş 1 ile 14 yaş arasındaki 31 çocuk gözlem altındaydı. üç çocuk toplam alanı da yaralar IHA-B yanık - vücut yüzeyinin 71-85% - hatta üç de,% 50-70 - IV derecesi% 40, 25 idi. Erken cerrahi necrectomy kültürlü allofibroblastov ve autodermaplasty nakli ile birleştirdi. Birinci aşama işleminde, ikinci nekrotik doku eksizyon yapılmıştır - kültürlenmiş allofibroblastov taşıyıcı filmin nakli, (kültive allofibroblastov naklinden sonra 48 saat), üçüncü - 1 autodermoplasty perforasyon oranı ile matris ve cilt kanatların çıkarılması: 4. Şiddetli yanık hastalığı olan hastaneye yatırılan üç hasta, kültürlü allofibroblasty yaraları küçük parçalara ayırmak üzerinde nakledildi. Kültürlü allofibroblastov Transplantasyon iki kez, 18 çocukta kez gerçekleştirilen - 11 yaşında, 3-2 hasta. Hücre kültürü tarafından kaplanan yara yüzeyinin alanı 30 ila 3500 cm2 idi. Cilt kanatlar, yanıkların tedavisinde ve ölüm sayısı ciddi termal yaralanma zaman nakledilmesi toplam yüzdesine göre değerlendirildi kültürlenmiş allofibroblastov etkinliği. Transplantların aşılanması hastaların% 86'sında tamamlandı. Olguların% 14'ünde deri fleplerinin kısmi görünümü görülmedi. Devam eden tedaviye rağmen, altı (% 19.3) çocuk öldü. İçlerindeki toplam cilt lezyonu alanı, vücut yüzeyinin% 40 ila 70'i idi. Kültürlü allofibroblastov Transplantasyon yanık yaralanmaları tek hasta ölümü hiçbir ilişkisi vardı.

3 yıla kadar - - tedavi sonuçları incelendiğinde, yazarlar uyumsuz hayatı ile önceki yanıklar, küçük çocuklar için vücut yüzeyinin (35-40% derisi alanının derin termal hasar tedavisinde dikkat% 30 bir alana sahip kritik derin yanıklar daha büyük çocuklar için vardır yaş - vücut yüzeyinin% 40'ından fazlası. Kültürlü necrectomy allofibroblastov autodermaplasty ve müteakip deri cerrahi transplantasyon büyük yanıklar, perforasyon faktörü IIIB ile greftler - IV derecesi kritik kalır, ancak şu anda bile böyle kurbanlarının hayatını kurtarmak için birçok durumda umutları vardır. Derin yanıklarda çocuklarda kültürlenmiş allofibroblastov ve autodermaplasty transplantasyonu ile birlikte cerrahi necrectomy donör bölgelerinin bir açık ile cildin ilerlemiş lezyonlar olan hastalarda özellikle etkili olduğu kanıtlanmıştır. Aktif cerrahi taktik ve nakli kültürlü allofibroblastov, bütünleşme için elverişli koşullar yaratarak, bu hastalar, yanık hastalığı bulaşıcı komplikasyonların sayısının azaltılması genel durumunun hızla stabilizasyonunu teşvik geniş yanık hastalarında ölümlerin görülme sıklığını azaltarak, hastanede tedavi kayıp cilt ve süresini geri süresini azaltmak. Bu nedenle, kültürlenmiş allofibroblastov nakli autodermaplasty deri kanatlar önceden mahkum kabul edildi ciddi yanıklar, çocuklarda iyileşme elde izledi.

Yanık hastalığını tedavi etmenin birincil amacının, ortaya çıkan toksik etkileri, enfeksiyöz komplikasyonları ve vücudun dehidrasyonunu önlemek için hasarlı cildin tam ve hızlı bir şekilde toparlanmasını en üst düzeye çıkarmak olduğu yaygın olarak kabul edilmektedir. Kültürlenmiş hücrelerin uygulanmasının sonuçları, büyük ölçüde, yanık yarasının transplantasyonuna hazırlıklı olmasına bağlıdır. Granüle yaralarına engrafman% 15 oranında azaltılır, cerrahi necrectomy sonrası yara yüzeyine kültürlenmiş keratinositler nakli durumlarında, nakledilen hücrelerin (alan ile)% 55 ortalama prizhivlyaetsya. Bu nedenle, kapsamlı derin cilt yanıklarının başarılı tedavisi, öncelikle, aktif cerrahi taktik gerektirir. Yanık yaraları IIIB-IV derecesinin varlığında, zehirlenme etkilerini azaltmak ve yanık hastalığının komplikasyonlarını azaltmak için yanık yüzeyi hemen nekrotik dokulardan salınır. Bu tür taktiklerin kullanımı, yanma anından yaraların kapanmasına kadar geçen süreyi kısaltmanın ve hastanede geniş yanıklara sahip hastaların kalış süresinin kısaltılması ve aynı zamanda ölümlerin sayısını önemli ölçüde azaltmanın anahtarıdır.

Son yüzyılın başlarında seksen keratinositlerin yanık yüzeyini örtmek için başarılı bir şekilde kullanıldığı ilk raporlar ortaya çıkmıştır. Bunu takiben, bu manipülasyon, çoğu zaman oto-yapılardan elde edilen kültürlenmiş keratinositlerin katmanları yardımıyla gerçekleştirildi, çok daha az sıklıkla allokeratinositlerden elde edildi. Bununla birlikte, keratinositlerden yeterli bir greft üretmek için gerekli süre büyüktür ve 3-4 haftaya kadar olan süre, otokratinositoplasti teknolojisi, bir hücre bankasının oluşturulmasına izin vermez. Bu süre zarfında, enfeksiyöz ve yanık hastalığının diğer komplikasyonları gelişme riski keskin bir şekilde artmakta, bu da hastanedeki hastaların toplam kalış süresini önemli ölçüde uzatmaktadır. Ek olarak, otokeratinositler, nakil sırasında yanık yaralarının granül haline getirilmesinde pratik olarak hayatta kalmazlar ve özel büyüme ortamı ve biyolojik olarak aktif keratinosit büyüme uyarıcılarının yüksek maliyeti, klinik uygulamalarını önemli ölçüde sınırlandırır. Kolajenoplasti, kriyoprezervasyonlu ksenoidlerin transplantasyonu ve çeşitli biyopolimer kaplamaların kullanılması gibi diğer biyoteknolojik yöntemler, geniş yüzeylerin tedavisinin etkinliğini artırır, fakat derin yanıklar değildir. Yaralanmış yüzeyin kültürlenmiş fibroblastlar ile kaplanması yöntemi, kültürlenmiş hücre havuzunun ana bileşeninin keratinositler değil fibroblastlar olması bakımından temel olarak farklıdır.

Yöntemin geliştirilmesi için ilk koşul, küçük damarları çevreleyen perisitler bağlı keratinosit proliferasyonu ve yapışma üzerinde güçlü bir uyarıcı etkisi çok büyüme faktörleri üretebilirler ve yara iyileşmesini sağlayan fibroblastlara dönüşümü mümkün pro genitornymi mezenkimal hücreler, bir kanıtı olarak görev yaptı. Yara yüzeyleri kapatılması için kültürlenmiş fibroblast kullanımı ile hemen kültürlenmiş keratinositler kullanımına göre bu yöntemin önemli avantajlarından belirlemiştir. Özel olarak, kültürde fibroblastlar hazırlanması 10 kat daha keratinositler elde etme maliyeti naklinin maliyetini azaltan özel kültür ortamı ve büyüme promoterlerinin kullanımı gerektirmez. Fibroblastlar kolayca kısmen da mümkün hücrelerin allojeneik transplantların üretimi için kullanımı ve bunların bankaların oluşturmak için yapar yüzey histokompatibilite antijenlerine kaybettiği boyunca pasaj, tabi tutulur. Alıcı nakli, 3 hafta (keratinositler) gelen bir klinik kullanıma hazır (fibroblastlar için) 1-2 gün kısaltır. Fibroblast birincil kültürleri, insan fibroblast fiş alt kültürler üzerinde autodermoplasty ve hücre tohumlama yoğunluğunda alınan deri parçaları hücrelerin kültürlenmesi ile elde edilebilir, yalnızca 20 x 10 3 1 cm başına 2.

Kolajen tip I ve III ve insan fibroblast ile ko-kültür fibronektin alt tabakalar üzerine keratinosit çoğalmasının fibroblastların etki ve çoğalmasında düzenleyici proteinler ve farklılaşmasını keratinositlerin, özellikleri karşılaştırmalı bir analiz ve morfolojisini incelenmesi. İnsan keratinositleri, otodermoplasti operasyonu sırasında alınan yanıkların cildinin parçalarından izole edildi. Keratinositlerin yoğunluğu, cm2 başına 50 x 103 hücre idi. Kültürlenmiş fibroblastların transplantasyonunun klinik etkinliği, 517 hastada değerlendirildi. Tüm hastalar iki gruba ayrıldı: 1 - yanıklar IIA, B - IV derece ile etkilenen yetişkinler; 2. - IIIB - IV derece derin yanıkları olan çocuklar. Glikosaminoglikanlar, fibronektin, kolajen yenilenmesi işleminde rolüne ilişkin fibroblast tek katmanlı kültürü yapısal ve fonksiyonel organizasyon dinamikleri değerlendirilmesi ve yazarlar nakli üretimi için fibroblast kültürleri kullanılarak en uygun koşullarda üçüncü günü olduğunu tespit etmek izin verdi. Fibroblast proliferasyonu ve keratinositler farklılaşması üzerindeki etkisinin incelenmesi gösterdiği in vitro fibroblastlar esas keratinosit yapışma süreçleri üzerinde belirgin uyarıcı etki, yapışan hücre sayısı ve en fazla 2 kez sabitleme oranını artırmak zorunda altında. Adezyon işlemlerinin uyarılmasına, DNA sentezinin yoğunluğundaki ve keratinositlerin proliferasyon seviyesindeki bir artış eşlik eder. Bundan başka, fibroblastlar ve bunlardan oluşan hücre dışı matrisin varlığı, keratinosit farklılaşması ve bazal membran oluşumu için, sonuç olarak, cihaz keratinosit arası bağlantıları tonofibrillyarnogo oluşumu için bir ön şart olan ve tespit edilmiştir. Derin yanıklar olan çocukların tedavisinde özellikle bir açığın cilt donör siteleri geniş lezyonu olan hastalarda, transplantasyon allofibroblastov kültürünün klinik etkinliğini kurdu. Kompleks morfofunktcionalnoe çalışma ise aşı, özelliği fibroblastlar hücre dışı matrisin hücrelerinde üretilen aktif DNA sentezi, hem de kolajen, fibronektin ve glikosaminoglikanlar. Yazarlar 10'da ((% 96) nakledilen fibroblast melezleşmenin yüksek bir yüzdesini (keratinosit halinde 2-3 saat yerine 24-48 hafta içinde) bunların hazırlanması açısından keskin bir azalma, yanma yüzeyinin epitelizasyon önemli bir hızlanma ve fiyat önemli bir azalma göstermektedir keratinosit transplantasyonu ile karşılaştırıldığında fibroblastlardan greft büyütme teknolojisinin zamanları). Eskiden yaşatılamayan düşünüldü vücut yüzeyine,% 50 üzerinde termal yaralanma - kültürlü allofibroblastov nakli kullanılması mümkün kritik yanığı olan çocukların hayatlarını kurtarmak için yapar. Embriyonik fibroblastların allojenik transplantasyon da inandırıcı çeşitli derecede yanık ve alanı ile yara ve nekahat hastaların daha hızlı rejenerasyonu, aynı zamanda mortalite önemli bir azalma sadece kanıtladı dikkat çekicidir.

Otolog fibroblastlar yerine düzeltme hasar ses tellerini gibi son derece karmaşık ve plastik cerrahide kullanılmaktadır. Genellikle, bu amaç için, bovin kolajen kullanılır, süresi immünojenisitesiyle sınırlıdır. Yabancı bir protein, sığır kollajen, kollajenaz alıcıya duyarlı olmak ve kolajen hazırlıkları teknoloji geliştirilmiştir riskini azaltmak için, bağışıklık reaksiyonlara neden olabilir, glutaraldehit ile çapraz bağlanmış. Bunların avantajı, daha büyük bir kararlılık ve kusurları ve ses telleri atrofi çıkarılması pratik uygulama alanı bulmuştur düşük immünojenisite vardır. Otolog kollajen enjeksiyonları ilk olarak 1995 yılında kullanıldı. Yöntem enzimatik olarak katalize edilmiş molekül içi çapraz bağlar dahil olmak üzere otolog kolajen liflerinin, primer yapısının korunması sağlanır. Doğal kolajen lifleri olup, burada kesilmiş sulandırılmış kolajen telopeptid daha proteazlar tarafından bozunmaya karşı daha dirençli olduğu gerçeği. Bütünlük kollajen liflerinin kuaterner yapısına ve bitişik kollajen molekülleri arasında çapraz bağlantı için önemli telopeptid. Sığır kollajeni preparatlar farklı olarak, otolog kolajen alıcıda immün yanıtları neden olmaz, ancak madde doldukça yeteri kadar etkili değildir. Kalıcı düzeltme, otolog fibroblast transplantasyonu ile yerel kollajen üretimi ile sağlanabilir. Ancak, klinikte otolog fibroblast nakli etkinliğinin araştırılması bazı sıkıntılar ortaya çıkardı. Sığır kollajeni uygulanmasından sonra edilene kıyasla transplantasyon fibroblast klinik etki sonra erken dönemde daha zayıf olmuştur. Kültürlenmiş otolog fibroblastları anormal normal fibroblast dönüşüm olasılığını ortadan zaman, bağlı fibroblastlar ve kolajen fibrilleri spesifik etkileşim için, kollajen jel azalma ile kanıtlandığı gibi fibroz ve skarlaşma gelişiminden sorumlu olarak adlandırılan miyofibroblastlar,. Bundan başka, seri pasaj sonra in vitro fibroblastlar hücre dışı matris proteinleri sentezleme kapasitelerini yitirmeye.

Bununla birlikte, şu anda, otolog insan fibroblastlarının kültürlenmesi tekniği, yukarıdaki dezavantajları ortadan kaldırarak ve normal fibroblastların onkojenik transformasyonuna yol açmayan deneysel olarak elimine edilmiştir. Bu yöntemle elde edilen otolog fibroblastlar, yüzün yumuşak dokularının kusurlarını doldurmak için kullanılır. H. Keller ve eş yazarlarının (2000) yaptığı bir çalışmada, 37 ile 61 yaş arasında kırışık ve atrofik skar olan 20 hasta tedavi almıştır. Deri biyopsileri biz kültür ortamında (Dulbecco'nun antibiyotik mikoseptikom, piruvat ve fetal inek serumu) 10 ml ihtiva eden steril tüplerde laboratuara nakledilir (4 mm), kulak arkası bölgesi. Malzeme, 60 mm'lik bir çapa sahip 3-5 kültür tabakasının içine yerleştirildi ve% 5 C02 içeren bir atmosfere sahip bir termostatta inkübe edildi. 1 hafta sonra, hücreler tripsinizasyon ile bulaşıklardan çıkarıldı ve 25 cm2'lik şişelere yerleştirildi. Hücreler, 4 x 107 arasında önemli ve uzun süreli bir klinik etki düzeltme burun dudak kıvrımları olan hastalarda gözlenmiştir miktarında hastalara uygulanabilir, ve otolog fibroblastları üçüncü nakil işleminden 7 ve 12 ay sonra yara izleri olan hastalarda edilir. Akış sitometrisine göre, kültürlenmiş fibroblastlar büyük miktarda Tip I kollajen üretti. İn vitro çalışmalar, enjekte edilebilir fibroblastların normal kontraktilitesini göstermektedir. 4 x 107 hücre dozunda kültürlenmiş fibroblastların deri altından verilmesinden iki ay sonra, çıplak fareler tespit edilmedi. Enjekte edilebilir fibroblastlar, hastalarda skar oluşumu ve yaygın fibrozise neden olmamıştır. Yazara göre, implante otolog fibroblastlar, sürekli olarak kozmetik gençleştirme etkisi verecek kolajen üretebilmektedir. Bu durumda, farklılaşmış hücrelerin yaşam süresi sınırlı olduğundan, genç bir hastadan alınan fibroblastlar yaşlılarda elde edilenlerden daha etkilidir. Gelecekte, genç bir vericiden alınan bir fibroblast kültürünün kriyoprezervasyonunun, daha sonra yaşlı bir hastaya kendi genç hücrelerine nakledilmesi varsayılmaktadır. Sonuç olarak, fonksiyonel korunma koşullarında otolog fibroblastların, yüzün yumuşak dokularındaki kusurların düzeltilmesinde ideal araç olduğu doğru bir sonuç değildir. Aynı zamanda, yazar, araştırma sürecinde, otolog bir fibroblast-kollajen sisteminin kullanımı ile bağlantılı bazı sorunlu durumların da ortaya çıktığını belirtmektedir. Klinik etki genellikle, hastalarda hayal kırıklığına neden olan büyükbaş kollajen kullanımına göre daha zayıftı.

Genel olarak, mezenkimal kök hücrelerin klinik kullanım beklentileri hakkındaki literatür verileri oldukça iyimserdir. Dejeneratif eklem lezyonlarının tedavisinde otolog kemik iliği multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin kullanılması için girişimlerde bulunulmuştur. Kemik kompleks kırıklarının tedavisinde kültürlenmiş mezenşimal progenitör hücrelerin ilk klinik denemeleri yürütülmektedir. Otolog ve travma veya otoimmün lezyonlar nedeniyle artiküler kıkırdak bozukluklarının düzeltilmesi nakli için kıkırdak doku üretmek için kullanılan allojenik mezenkimal stromal kemik iliği hücresi nakledildi. Tip I genindeki mutasyonların neden olduğu ciddi bir eksik osteogenezisi olan çocuklarda kemik defektlerinin eliminasyonu için multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin klinik uygulama yöntemleri geliştirilmektedir. Ağır kemik defekti doldurmak için mezenkimal kök hücrelerin yeterli bir miktarını ihtiva edebilir, fraksiyone edilmemiş kemik iliği gibi HLA-uyumlu, sağlıklı bir vericiden nakledilen kemik iliği mieloabelyatsii çocuklara alıcıları sonra. Allojeneik kemik iliğinin transplantasyonundan sonra, bu tür çocuklarda trabeküler kemiklerde pozitif histolojik değişiklikler, büyüme oranında bir artış ve kemik kırıklarının insidansında azalma vardı. Bazı durumlarda, yakından ilişkili allojenik kemik iliği ve osteoblastların transplantasyonu ile pozitif bir klinik sonuç elde edilir. Kemik dokusunda osteoblast ve osteoklastların dengesizliğine bağlı kemiklerin konjenital frajilitesinin tedavisi için MSK transplantasyonu da kullanılır. Bu durumda kemik oluşumunun restorasyonu, hastaların kemik dokusunda kök ve progenitör stromal hücrelerin havuzlanmasına bağlı olarak elde edilir.

Verici mezenkimal kök hücrelerin genetik modifikasyon yöntemleri stromal dokuların genetik kusurlarını düzeltmek için geliştirilmektedir. Mezenkimal öncü hücreler yakında yönlü kimerizasyon beyin hücreleri için nöroloji kullanılan ve hastalığın klinik belirtileri sorumlu eksik enzimi veya faktörünü üretebilen sağlıklı hücrelerden oluşan bir havuz oluşturmak olacağı tahmin edilmektedir. Mezenkimal kök hücrelerin transplantasyonu, kanser hastalarında radyo ve kemoterapiden sonra kemik iliği stromasını ve kemik iliği hücrelerinin birleşmesiyle birlikte hemopoezi geri kazandırmak için kullanılabilir. MSC ile kas-iskelet sisteminin kusurlarının ortadan kaldırmayı amaçlayan ikame tedavisinin geliştirilmesi mezenkimal kök hücrelerin soyunu yaşayan iskeletler oluşturan tasarım matris biyomalzeme ya da Biyomimikler mühendislik teşvik eder.

Mezenkimal kök hücrelerin kaynakları

Mezenkimal kök hücre kaynağı, memelilerde sürekli mezenkimal kök hücreler, fibroblast-benzeri kemik iliği stromal hücreleri, küçük popülasyonlar sunulan ise, kan hücreleri ve bağışıklık sistemi dönüştürmek ve hematopoietik kök hücrelerin farklılaşmamış halinin muhafaza edilmesine yardımcı olan, kemik iliği hematopoetik kök hücreleridir. Belirli koşullar altında, mezenkimal kök hücreler, kıkırdak ve kemik hücreleri içinde farklılık gösterir. Düşük yoğunluklu dikim mononükleer kemik iliği stromal hücreleri bir kültür ortamına ekilir Aslında, fibroblast çok potansiyelli mezenkimal hücreler, yapışkan hücreler, koloniler oluşturur. Bazı yazarlar kemik iliği yeteneğine kendini yenilemek ve yüksek farklılaşma potansiyeli, vücuttaki tüm dokuları yaşam memeli organizma boyunca mezenkimal stromal hücreleri öncekilerden sağlamak, teşekkür kararsız mezenkimal kök hücreleri, yatırılan ileri sürmüşlerdir.

Kemik iliğinde stromal hücre elemanları, sinüzoitler ve kemik dokusu arasındaki boşluğu dolduran bir ağ oluşturur. Bir yetişkinin kemik iliğindeki uykusal MSC'nin içeriği, hematopoietik kök hücre sayısıyla karşılaştırılabilir ve% 0.01-0.001'i aşmaz. Kemik iliğinden izole edilen ve ekime tabi tutulmayan mezenkimal kök hücreler, yapışkan moleküllerden yoksundur. Bu MSC'ler CD34, ICAM, VCAM, tip I ve III kolajen, CD44 ve CD29 eksprese etmez. Bu nedenle, in vitro mezenkimal kök hücreler, kültür alt-tabaka üzerinde sabit değildir, ve daha gelişmiş progenitör türetilmiş mezenkimal stem hücreleri, hücre iskeleti bileşenleri ve hücre adhezyon moleküllerinin reseptör aparatı oluşturmuşlardır. Periferik kanda bile fenotip CD34 ile stromal hücreler bulunur, ancak kemik iliğinde CD34-pozitif mononükleer hücrelerden daha az bulunurlar. Kandan izole edilen ve kültüre aktarılan CD34 hücreleri, substrata yapışır ve fibroblast benzeri hücrelerin kolonilerini oluşturur.

Embriyonik dönemde memelilerin ve insanların tüm organ ve dokularının stromal tabanının organojenez aşamasında ve öncesinde ortak bir mezenkimal kök hücre havuzundan oluştuğu bilinmektedir. Bu nedenle, olgun bir vücutta, mezenkimal kök hücrelerin çoğunun bağ ve kemik dokusunda olması gerektiğine inanılmaktadır. Gevşek bağ ve kemik dokusunun stroma hücresel elemanlarının çoğunluğunun, in vitro olarak klonlann çoğalması ve oluşturması yeteneğini koruyan, kararlı progenitör hücreler tarafından temsil edildiği tespit edilmiştir. Bu tür hücrelerin toplam kan akışına girmesiyle birlikte, hematopoietik dokunun ve parankimal organların stromal elemanları arasında, mesenşimal progenitör hücrelerin% 20'sinden fazlası implante edilir.

Mezenkimal kök hücrelerin olası bir kaynağı, yağlı bir dokudur adiposit progenitörlerinin değişen derecelerde bulunan kararlı kök hücrelerin bunlar arasında. Stromal vasküler hücreler, kemik iliği çok potansiyelli mezenkimal projenitörleri glukokortikoid, insüline benzer büyüme faktörü ve insülin etkisi altında adipositler içinde farklılaşabilmektedir aynıdır - adipoz dokusu az olgun progenitör elemanları. Stromal vasküler hücre kültüründe adipositler ve osteoblastlar oluşturan adipositler ve kondrositler ve adipoz doku, kemik iliğinden türetilmiş hücreler içinde farklılık gösterir.

Kaslarda stromal kök kaynakları da bulundu. İnsan iskelet kaslarından izole edilen hücrelerin birincil kültüründe, yıldız şeklindeki hücreler ve çok çekirdekli miyotüpler bulunur. At serumu yıldız hücrelerin varlığında sito-farklılaşma belirtisi olmadan ve farklılaşma kültür ortamı, iskelet ve düz kas, kemik, kıkırdak ve adipoz dokusu fenotipi ile hücre elemanları hücre ile karakterizedir deksametason eklenmesinden sonra in vitro olarak çoğalır. Sonuç olarak, hem işlenmiş hem de yanıtsız multipotent mezenkimal progenitör hücreler, insan kas dokusunda mevcuttur. Iskelet kaslarında bulunan progenitör hücrelerin bir popülasyonu kaydedilmemiş çok potansiyelli kemik iliği mezenkimal progenitör hücrelerinin gelir, içi ve kas uydu hücrelerinden farklı olduğunu gösterilmiştir.

Bunlar iskelet kası ve kalp miyositlerinin adipositler osteoblastlar, kondrositler, düz kas hücreleri, myotubes ayırt deksametazon etkisi altında yenidoğan sıçan miyokard olarak da, çok yetili mezenşimal öncül hücrelerin farklılaşması potansiyeli için uygun bir yapıştırıcı, yıldız hücreleri bulundu. Damarsal düz kas hücreleri (perisitler) çok potansiyelli farklılaşmamış perivasküler mezenkimal hücrelerin türetilmiş olduğu gösterilmiştir. Perivasküler mezenkimal kök hücrelerin kültüründe a-düz kas aktin ve trombosit kaynaklı büyüme faktörü reseptörü eksprese eden ve en az bir düz kas hücreleri ayırt etmek mümkündür.

Kök rezervleri açısından özel bir yer, son derece düşük reparatif potansiyelinin, multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin eksikliğine veya farklılaşma ve büyüme faktörlerine bağlı olduğuna inanılan kıkırdak dokunundır. Kondro- ve osteogenezise önceden bağışlanmış olan multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin diğer doku kaynaklarından kıkırdak dokuya girdiği varsayılmaktadır.

Tendonlardaki mezenkimal progenitör hücrelerin komisyonu için doku kaynağı ve koşulları da oluşturulmamıştır. Ekspermentalnye gözlemler ilk pasajda primer kültürlerinde erken doğum sonrası tavşan Aşil tendonu hücrelerinde ve kollajen tip I ve dekorin ifadesini korumak düşündürmektedir, ancak daha fazla kültürleme üzerine onlar tenotsitov farklılaşma işaretleri kaybederler.

Gerçekten çok potansiyelli mezenkimal progenitör hücrelerin çeşitli dokularda lokalize sorusunun yanıtı her zaman kendi stromada bulunan, ya da mezenkimal kök hücrelerin doku havuzu, hala beklenmektedir stromal kemik iliği kök hücrelerinin göçü ile telafi edilmektedir unutulmamalıdır.

Ayrıca MSC'lerin bir kaynak kemik iliği ve diğer mezenşimal doku bölgeleri yetişkin kordon kanı olabilir. Göbek bağı damarı kan potansiyeli farklılaşarak kemik iliği kökenli multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin yapışma yeteneğine sahip olup aşağı olan çok potansiyelli mezenkimal progenitör hücreler ile benzer morfolojik ve antijenik özelliklere sahip hücreleri ihtiva etmesi ile gösterilmiştir. 5 ila% 10 kaydedilmemiş çok potansiyelli mezenkimal progenitörlerinden tespit göbek kordonu kan mezenkimal kök hücrelerin kültürlerinde. Bu kordon kanında sayıları cenin gelişimi sırasında çeşitli dokulara multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin göç dolaylı kanıtıdır gebelik yaşı, ters orantılı olduğu ortaya çıktı. Fetal kök hücrelerin bilinen yeteneğine dayanır göbek kordonundan izole mezenkimal kök hücrelerin klinik uygulaması, aynı zamanda embriyo türevli biyo materyalin, ilgili ilk bilgileri entegre ve organ ve doku sistemlerinin yetişkin alıcıları fonksiyon prizhivlyatsya vardı.

Yeni mezenkimal kök hücre kaynakları araştırması

Diğer fetal hücreler gibi, embriyonik orijinli mezenkimal kök hücrelerin kullanımı, bir dizi ahlaki, yasal, yasal ve yasama problemi yaratır. Bu nedenle, extraembryonic hücresel verici malzeme arayışı devam etmektedir. Girişimi, insan derisi fibroblastlarının başarısız klinik uygulaması, önemli ölçüde daha az potansiyel proliferasyonu olan ve büyüme faktörleri sınırlı sayıda üreten fibroblastlara teknolojinin yüksek finansal kapasitesi, aynı zamanda fibrositlerinin hızlı farklılaşma sadece belirlendi oldu. MSK ve multipotent mezenkimal kemik iliği öncülerinin biyolojisini incelemede daha fazla ilerleme, otolog mezenkimal kök hücrelerin klinik kullanımı için bir stratejinin geliştirilmesine olanak sağlamıştır. İzolasyon, kültivasyon, ex vivo reprodüksiyon ve yönlendirilmiş farklılaşma teknolojisi, her şeyden önce, MSC'lerin moleküler işaret spektrumu çalışmasını gerektirdi. Analizleri, insan kemik dokusunun birincil kültürlerinde çok sayıda multipotent mezenkimal progenitör hücre olduğunu göstermiştir. Pro-osteoblast fenotipi, bir stromal prekürsör hücrelerinin STRO-1 markörünü eksprese eden fakat bir osteoblast markörü - alkalin fosfataz taşımayan hücrelerde bulunmuştur. Bu tür hücreler, osteopontin ve paratiroid hormon reseptörü ekspresyonunun yokluğunun yanı sıra mineralize bir kemik matriksi oluşturma kabiliyetleri ile karakterize edilir. Alkalin fosfatazı ifade etmeyen STRO-1-pozitif hücrelerin türevleri, ara ve tamamen farklılaşmış osteoblastlar ile temsil edilir. İnsan trabeküler kemiklerinin STRO-1-pozitif hücrelerinin klonlanmış hatlarının hücresel elemanlarının olgun osteositlere ve adipositlere farklılaşabildiği saptanmıştır. IL-1b ve tümör nekroz faktör alfa (TNF-a), aynı zamanda, anti-enflamatuar ve bağışıklık bastırıcı, TGF-b -, bu hücrelerin yönü farklılaşması çok-doymamış yağlı asitler, inflamatuar öncesi sitokinlerin maruz bağlıdır.

CD45, CD34 ve CD14 - Daha sonra çok potansiyelli mezenkimal hücreler, sadece doğal fenotip kendilerine özgü eksikliği, ama mezenşimal, endotel, hematopoietik hücre immünofenotipik antijenlerinin ekspresyonunun yokluğunda epitel ve kas hücreleri için karakteristik kompleks belirteçler, eksprese ettiği bulunmuştur. Buna ek olarak, temel olarak mezenkimal kök hücreleri ve indüklenebilir hematopoetik ve non-hematopoetik büyüme faktörleri, interlökinler, kemokinler ve ve bazı büyüme faktörleri ve sitokinler için reseptörlerine çok potansiyelli mezenkimal hücreler üretir. "Yetişkin" kök hücre işaretleme, bu ve diğer hücrelerin CD117 eksprese - stromal hücreler arasında insan vücudunun temelleri ham 5-florourasil çok potansiyelli mezenkimal progenitör hücrelerinin antijenik profiline hemen hemen aynı immunofenotip ile dormantnye veya dinlenme hücreleri bulundu.

Bu nedenle, mezenkimal kök hücrelere özgü bir hücre markeri henüz oluşturulmamıştır. Onlar osteoartrit (CBFA-1) veya adipojenez (PPAR-y-2) kararlı hücre işaretlerini ifade yoktur çünkü dinlenme hücreler çok potansiyelli mezenkimal hücrelerin kaydedilmemiş popülasyonları olduğu varsayılmaktadır. Yavaş yavaş çoğalan dinlenme hücrelerinin fetal buzağı serumu uzamasına uzun süre maruz kalması, hızlı büyüme ile karakterize olan, terminal olarak farklılaşmış prekürsörlerin oluşumuna yol açar. Bu tür sap mezenkimal hücrelerin klonal büyümesi FGF2 tarafından desteklenir. Bu genom kaynaklı stromal kök hücreler sıkı yeterince MKH spontan farklılaşma yokluğunda yaklaşık bildirilmiştir "kapalı" görünür -. Hatta onlar mezenkimal serisinin hücrelere dönüşmemiş işlemekten özel şartlar olmadan.

Stromal hücre hatları ve primer kültürlerinde mezenkimal kök hücre aranır farklılaşma işaretleyici proteinleri türetilmiş nüfus yapısını incelemek için. Klonal koloni deneyi Kemik iliği hücrelerinde, in vitro olarak, EGF primer kültürlerinde tabi tutulduğunda hidrokortizon eklenmesi MSC yönlendirme osteojenik farklılaşma işareti olan alkalin fosfataz ifadesini aktive ederken, kolonilerin ortalama boyutunu artırır ve alkalin fosfataz klonal ekspresyonuna azalttığı bulunmuştur. Stro-1'e karşı monoklonal antikorlar mümkün ayrılması ve heterojen bir sistem Dexter kültürlerde stro-1-pozitif yapışık hücre çalışma popülasyonları için yapılmıştır. Sitokinlerin spektrumu sadece çoğalmayı ve hematopoietik ve lenfoid hücrelerinin farklılaşmasını düzenleyen değil, aynı zamanda oluşumu, para-, oto- ve endokrin mekanizmalarla oluşumu ve iskelet dokusu erimesi katılabilir. örneğin cAMP, diasilgliserol, inositol trifosfat ve Ca2 + gibi ikinci haberciler reseptöre bağlı salimli da ilgili reseptörleri ifade eden hücrelerin stromal dokuların farklı kategorilerinin marker analizi için kullanılmıştır. Belirteç olarak monoklonal antikorların kullanımı T ve B bağlı bölgeler için retiküler hücreler ait stromal lenfoid organlar oluşturmasına izin.

Bir süredir bilimsel anlaşmazlıklar, MSC'nin hematopoietik kök hücreden kaynaklanma ihtimali sorusu etrafında devam etti. Gerçekten de, kemik iliği hücrelerinin süspansiyonunun tek tabakalı kültürler halinde açıklanmasıyla birlikte, fibroblastların ayrı kolonileri bunların içinde büyür. Bununla birlikte, fibroblast koloniler ve kemik iliği bir parçası olarak hematopoietik dokularının çeşitli mikroplar farklılaşma öncülerinin varlığı hematopoietik kök hücrelerinin ortak kökenli kanıtı olmadığını gösterilmiştir. Hematopoetik hücrelerin histogenezi MSC nüfusun bağımsız kemik iliğinde, varlığını kanıtlıyor heterotopik transplantasyon mikro çevre, kemik iliğinin hematopoetik hücreler aktarılmasını bulunan kemik iliği kök hücrelerinin ayırma analizi, kullanma.

Buna ek olarak, seçici bir klonlama metodu özellikleri, proliferatif ve farklılaşma potansiyelini incelemek için, sayıları belirlemek için ön-madde hücreleri yeni bir kategori, kemik iliği stromal hücrelerinin tek tabakalı kültürleri içinde saptandı. Bu in vitro olarak fibroblast benzeri stromal hücreler çoğalmaya ve diploid koloniler oluştururlar bulunduğu zaman bu, yeni kan yapıcı organ oluşumuna katkıda vücuda ters nakli. Bireysel klonların çalışmaların sonuçları stromal dokusunun, stromal progenitör hücrelerde hematopoetik kök hücrelerin Gistogeneticheskaja bağımsız olarak kök hücrelerin rolünü iddia edebilmek çoğalma ve farklılaşma potansiyelinin bir hücre popülasyonu olduğunu göstermektedir. Bu popülasyonun hücreleri kendi kendini idame ettiren büyüme ile karakterize edilir ve kemik, kıkırdak ve retiküler kemik iliği dokusunun progenitör hücrelerine farklılaşır.

Asıl ilginç olan kültürlenmiş kemik iliği kaynaklı stromal progenitör hücrelerin tavşanlar, gine domuzları ve cenin dana serumu ile takviye edilmiş a-MEM kültür ortamının farelere çalışmalar Chailakhyan R. Ve arkadaşları (1997-2001), bir sonucudur. Yazarlar, 1 cm2 başına 2-4 x 103 kemik iliği hücresi başlangıç yoğunluğu ile açıklama yaptı. Kullanılan besleyici homolog ya da heterolog bir doz besleme tutma eylem kemik iliği hücrelerinin ışıma tarafından etkisiz hale ancak tamamen bloke proliferasyonu olarak. İki haftalık birincil fibroblast kolonileri monoklonal suşları üretmek için tripsinize edildi. Kanıt klonal kökenli koloniler erkek ve dişi kobay, zaman atlamalı çekim canlı kültürler, kemik iliğinin karışık kültürlerinde aynı zamanda, genetik olarak özdeş fare ve FMA SVAT6T6 kemik iliği karışık kültürlerden kromozomal markerler kullanılarak elde edilmiştir. Böbrek kapsülü altında nitro ya da stromal fibroblastlann yetiştirilen yeni izole edilmiş kemik iliği hücrelerinin nakli bulamaç ivalonovyh gözenekli iskeleler veya jelatin gibi etkisiz hale getirilmiş tavşan süngersi kemik matrisi içinde yürütülmüştür. Yumuşak doku ve periosttan temizlenmiş kemik kapak uyluk kobay içine nakli klonlar, epifiz kesilmiş ve iyice kemik iliği yıkama. Kemik, parçalara (3-5 mm) kesildi, kurutuldu ve 60 Gy'lik bir dozda ışınlandı. Kemik kapaklarında, bireysel fibroblast kolonileri yerleştirildi ve intramüsküler olarak implante edildi. In vitro yetiştirilen stromal fibroblastlann intraperitoneal transplantasyonu için, tipleri bir difüzyon bölme (V = 0,015 cm3, h = 0, l mm) ve D (V = 0,15 cm3, h = 2 mm) kullanılmıştır.

Klonal suşları Chailakhyan R. Ve arkadaşları (2001), büyüme dinamiği incelenirken tek tek hücreler, koloni oluşturan fibroblastlar, aynı zamanda bunların soyundan büyük bir çoğalma potansiyeline sahip olduğu bulunmuştur. 10. Pasajda, bazı suşlardaki fibroblast sayısı 1.2-7.2 x 10 9 hücre idi. Gelişim sürecinde, 31-34 hücre çoğaltmaları gerçekleştirdiler. Birkaç düzine klon yeni bir bölge hematopoietik organ nakli kemik iliği mikro ve eğitim transferine yol stromal ön oluşturduğu kemik iliğinden türetilmiş soyların Böylece heterotopik nakli. Yazarlar bireysel klonlar kemik iliği mikro-stromal hücreleri tolere sorusunu gündeme veya birkaç farklı clonogenic stromal pregenitörü işbirliğini gerektirir? Ve bireysel klonlar her üç germ kan dolu veya farklı klonlar farklı mikroplar için hematopoetik mikroçevresinin oluşumunu sağlamak olsun, mikroçevresinin aktarmak mümkün olacak olursa? Bu sorunları gidermek için size müteakip heterotopik transplantasyon için koloniler yetiştirilen fibroblastların yüzeyinden çekim sağlayan kollajen jel ekimi stromal progenitör hücrelerin teknoloji geliştirilmiştir. Tek tek klonlar, stromal fibroblastlar, jel kaplama ve transplante edilmiş heterotopik bir fragmanı ile birlikte kesme CBA fareler ve guinea domuzları yetiştirilen kemik iliği hücreleri, - singeneik fareler veya otolog kas göbek kobayların böbrek kapsülü altında. Kas içine transplantasyon yapıldığında, jeldeki koloniler kemik kapaklara yerleştirildi.

Şaşırtıcı bir şekilde, kemik ya da kemik ve hematopoetik doku nakli alan geliştirme gözlenmiştir, vakaların% 20'sinde kemik iliği fibroblast koloni naklinden sonra 50-90 gün. Alıcı hayvanların% 5'inde, oluşan kemik dokusunun odakları kemik iliği ile dolu bir boşluk içeriyordu. Kemik silindir içinde bu odaklar yuvarlak bir şekil ve kemik dokusunun imal edilen bir kapsül, kemik ve gelişmiş osteoblastik tabakası vardır. Kemik iliği boşluğu miyeloid ve eritroid hücreleri, normal kemik iliği olduğu farklılık göstermemektedir oranlan ile ağ kumaşı içerir. Böbrek greft kemik kapsül böbrek kapsülden yalnızca medüller kapsayan doğal kemik iliği nakli ile oluşan tipik bir medüller vücut oldu. Kapşonlu doku miyeloid, eritroid ve megakaryositik elementleri içeriyordu. Medüller boşluğun stroması iyi gelişmiş bir sinüs sistemine sahipti ve tipik yağ hücrelerini içeriyordu. Hematopoez işareti ile bazı koloniler kemik nakli alanında, aynı zamanda böbrek kapsülü altında bulunmuştur. Tek tek klonlar proliferatif ve farklılaşma potansiyelinin çalışma hücreler, kültür ortamı içinde ve tavşan kemik iliği donörünün böbrek kapsülü altında sıkışmış 1-2 mg ağırlığında ayrı ivalonovoy sünger içinde tekrar süspanse edilir, monoklonal tavşan kemik iliği suşlarına devam edilmiştir. Bu ototransplantasyon, 21 monoklonal suşun hücrelerine tabi tutuldu. Sonuçlar 2-3 ay içinde göz önüne alınmıştır. Yazarlar, oluşturulmuş karın hematopoetik hücreler ile doldurulmuş, kemik ve kemik iliği boşluğu oluşan Nakledilen kemik iliği monoklonal soylarının% 14 olmuştur. % 33 oranında içinde nakledilen suşlar osteoblastik ve gelişmiş katmanda tuğla ostootsitami değişik ebatta boşluklara sahip kompakt kemik kurdu. Bazı durumlarda, süngerler nakli klonlar kemik veya hematopoetik hücreler olmadan retikulum geliştirdi. Bazen retiküler stroma oluşumu sinüsoidlerinin iyi gelişmiş ağ ile oluştu, ancak hematopoetik hücreler doldurulur. Böylece elde edilen sonuçlar, bir kolajen jel üzerindeki klonların transplantasyonunda elde edilenlere benzer olmuştur. % 15 ve retiküler kumaş - - Bununla birlikte, klonlar, transplantasyon iliği dokusunun oluşumu ile sonuçlandı substrat üzerinde yetiştirilen kemik% 5 olduğu durumlarda% 80, transplantasyon monoklonal kemik vakaların% 14 gözlenmiştir kemik iliği hücrelerinin oluşumunu suşları - % 53'ünde ve retiküler -% 53'ünde. Yazarlara göre, bu gözenekli iskeleler üzerine transplante stromal fibroblastlann proliferatif ve farklılaşması potansiyeli uygulanması için koşullar kemik içindeki nakli ile daha uygun olduğunu gösterir ve kollajen substratı kapsar. Yetiştirme ve klonlar geribildirim nakli daha gelişmiş yöntemlerin kullanımı, klonlar farklılaşma potansiyelleri uygulama şartlarının iyileştirilmesi ve bu ilişkileri değiştirebilir ihtimal dışı değildir. Yeterince büyük eritroid, miyeloid ve megakaryositik oluşturma hematopoietik doku ile ayak: Öyle ya da böyle, ancak araştırma temel değeri, kemik iliği, kan, üç filizi derhal stromal hematopoietik mikro-sağlarken kemik dokusunun oluşturabilen klonların bazılarının, stromal hücreleri yatmaktadır Bazı kemik kütlesi.

Ayrıca, yazarlar, bu tipteki hücrelerin, ayrı bir difüzyon odacığı sistemi koşullarında, bireysel klonal stromal progenitör hücrelerin farklılaşmasını sağlama problemini çözmüştür. Pluripotent sergi veya potansiyel ayırt etmek için görüntü tek tek klonlar, bir sabit işareti sito-farklılaşma ile çok sayıda klonun ortak etkileşim gerekli olup olmadığını Ayrıca, tespit için gerekli olduğunu, farklı bir oran olan kemik, kıkırdak ya da retiküler tercihli oluşumunu belirler. Iki yöntem yaklaşımları birleştirerek - kemik iliği stroma yapısal organizasyonu anlaşılmasını yaklaşmasına izin sonuçlar elde edilen monoklonal kemik iliği stromal progenitör hücreler izole ve yayılma odaları, Chailakhyan R. Ve (2001) al içine nakli. Grubu O hücrelere nakli monoklonal soylar stromal progenitör hücreler eş zamanlı olarak kemik ve kıkırdak oluşturan bir koloni oluşturan stromal hücrelerin döl yeteneğini gösteren, hem de kemik ve kıkırdak dokusundan oluşması ile sonuçlanmıştır. Kemik ve kıkırdaklı dokunun ortak stromal progenitör hücreden kaynaklandığı varsayımı tekrar tekrar tekrar ifade edilmiştir. Bununla birlikte, bu hipotez doğru bir deneysel doğrulamaya sahip değildi. Yayılma odaları kemik ve kıkırdak oluşumunu kök hücrelerin varlığı doku Bu iki tip ortak kemik iliği stromal öncü hücreleri içerir kanıtlamak için gerekliydi.

Daha sonra 29 klonal suşları, ikinci ve üçüncü bölümler, tavşan, kemik iliğinden türetilen primer kültürler yayılma odaları içine yerleştirilmiş ve periton içine, homolog hayvan implante edildi. Çalışmalar, kemik iliği monoklonal suşlarının% 45'inin osteojenik potenslere sahip olduğunu göstermiştir. Son derece ağ kumaş odaları 9 ihtiva etmez, fakat kemik ve kıkırdak dokusu ile tüm suşlar% 76 temsil eden, yine odaları 13 bulunur. Hem kemik hem de kıkırdak dokuda farklılaşmanın mümkün olduğu O tipi odacıklarda 16 suş incelenmiştir. Dört odada (% 25), hem kemik hem de kıkırdak dokusu oluşturuldu. Yine çalışmalar Chailakhyan R. Ve diğerleri, (2001), ayrı ayrı progenitör hücreler 31 ila 34 ikiye katlanma oluşan hücre soyu geçirdiğine dikkat edilmelidir, ve döl 0.9-2.0 x 10 idi 9 hücreleri. Poliklonal suşların prekürsör hücrelerinin maruz kaldığı mitoz sayısı, monoklonal suşların hücrelerininkiyle aynıydı. Soyları başlatmak için kullanılan koloni sayısına bağlıdır, büyük ölçüde, özellikle de ilk oluşum aşamasında poliklonal türlerin oluşmasından dolayı Böylece hızı. Katlama seviyeleri inci 12-15 reklonirovanii insan embriyonik fibroblastlar (WI-38) diploid türler aynı zamanda, farklı çaplardaki koloniler oluşturulmuştur ve hücrelerin içindeki yoğunluğu. 103'den fazla hücre içeren büyük koloniler sadece% 5-10'dur. Bölmelerin sayısındaki artışla, büyük kolonilerin yüzdesi azaldı. Mono-ve poliklonal kemik iliği stromal fibroblast suşlan 20 ya da daha fazla iki katına çıkması sonrası bir diploid kromozom muhafaza ve gelişme eğilimi diploid suşlarının embriyonik fibroblastlar dinamikleri ile karşılaştırılabilir. Yayılma odaları transplantasyon monoklonal suşları tarafından gerçekleştirilen spesifik bir kemik iliği stromal projenitör hücrelerinin farklılaşması potansiyeli değerlerinin analizi, yarısı osteojenik gösterdi. Büyük koloniler toplam sayısının% 10'unu oluşturuyordu. Sonuç olarak, osteojenik koloni oluşturan hücrelerin sayısı, toplam popülasyonunun yaklaşık% 5'ine karşılık geldi. Yazarlar tarafından tanımlanan toplam osteojenik progenitör hücrelerin kütlesinde, aynı anda kemik ve kıkırdak doku oluşturabilen hücreler vardı. Test edilen klonların% 25 benzer hücreler tarafından oluşturulan ve progenitör hücreler genel popülasyonunda sayıları% 2.5'ten az değildi: ilk kez bu yetişkin organizmada dokuların bu iki tip ortak öncü hücre olduğu bulundu.

Bu durumda, kemik iliği, fibroblastların heterotopik nakli tek tek klonlar, mezenşimal öncül hücrelerin bir popülasyonunun yapısal organizasyonu yeni yönlerini açtı. Farklı modeller büyük incelenmiştir klon arasında sayısı% 5 ile 15 (tespit progenitör hücrelerin toplam sayısının% 0.5-1.5) için tüm Hemopoietik kök için hemen spesifik mikro-transfer edebilen Bulunan stromal progenitör hücreler. Klonlar ile birlikte, komple kemik iliği mikro ortamı aktarılması, sadece açık bir sisteme aktarılan formu kemik oluşumu, hemopoeziste gelişimini desteklemeyen kemiğe deterministik progenitör hücreler vardır. Toplam progenitör hücre sayısından% 1.5-3'tür. Bu hücrelerin bazıları sınırlı bir öz bakım periyodu ile kemik dokusunu oluşturabilir. Sonuç olarak, stromal progenitör hücrelerin popülasyonu farklılaşma potansiyelinde heterojendir. Bunlar arasında, kemik iliği stromal dokusunun içerdiği her üç boyutta farklılaştığı kemik, kıkırdak ve retiküler doku oluşturma yeteneğine sahip stromal kök hücrelerinin rolünün iddia bir hücre kategorisi vardır. Bu veriler bize çeşitli hücre belirteçleri yardımıyla belirli organizasyonun mikroortamındaki stromal hücrelerin her tür katkıyı belirlemek ve Dexter kültürlerde hematopoezisi desteklemek mümkün olacağını umuyoruz sağlar.

Mezenkimal kök hücrelerin özellikleri

Son yıllarda, bu kemik iliği, hareketsiz kültürlerden mezenkimal çok potansiyelli progenitör hücreler çoğalan hücrelerin spesifik Ki-67 antijen ekspresyonunun kolonizasyon ve yokluğunda düşük kabiliyeti ile karakterize küçük agranular hücreleri (RS-1) hücreleri, sınırlı bir popülasyonunu sunulmaktadır bulundu. Hareketsiz RS-1 hücrelerinin antijenik parametreleri, hızlı çoğalan kaynaklanmış stromal progenitör hücrelerin antijen spektrumundan farklıdır. İşlenmiş progenitör hücrelerin yüksek oranda proliferasyonunun sadece RS-1 hücrelerinin varlığında gözlemlendiği bulunmuştur. Buna karşılık, RS-1 hücreleri, en olgun türevli çok potansiyelli mezenkimal progenitör hücreleri tarafından salgılanan faktörlerin etkisi altında büyüme oranını arttırır. RS-1 hücrelerinin, geri dönüşümü mümkün olmayan, ayrışmamış MSC'lerin bir alt sınıfı olduğu görülmektedir. Düşük RNA içeriğinin ve ornitin dekarboksilaz geninin ekspresyonunun yüksek seviyeleri ile karakterize edilen kemik iliği 5-fluorourasil, stromal progenitör hücrelerin dirençli in vitro - işaretleyici hücrelerinin proliferasyon.

Stromal progenitör hücrelerin yoğun reprodüksiyonu, substrat üzerindeki fiksasyondan sonra başlar. Zaman yetersiz diferansiye hücrelerin bu ifade edilir işaretçi profili: SH2 (TGF-reseptör (3), SH3 (alan sinyal proteini), kolajen tip I ve III, fibronektin, yapışma reseptörü VCAM-1 (CD106) ve ICAM (CD54), kaderin-11 , klonal büyüme art arda bir çok genetik olarak, homojen stromal progenitör pluripotent bir kültür elde etmek için mezenkimal kök hücreleri geçirilir sağlayan, CD90, CD120a ve CD124 ancak hematopoietik kök hücreler (CD34, CD 14, CD45) karakteristik markerlerin ekspresyonu olmadan. CD44, CD71 (transferin reseptörü) hücreler. Cerea 2-3 bunların sayısının geçişi 50-300 milyon ulaşır. Yeterli yoğunlukta kültüründe stromal progenitör hücrelerin çoğalmasını durdurma sonrası, hematopoietik dokusu fıbroblastlan, adipositler, miyositler, kıkırdak hücreleri, kemik dokusunun farklılaşırlar aksine. Üç farklılaşma düzenleme sinyallerinin birleşimini 1-metil-izobutilksantin (hücre içi cAMP oluşumunun uyarıcı), deksametazon ve indometasin (bir siklooksijenaz inhibitörü, tromboksan düşürücü aktivite ve) (fosfolipaz a ve C inhibitörü) ihtiva eden döner Progenitör mezenkimal hücrelerin% 95'e kadar adipositler. Olgunlaşmamış stroma hücrelerinden adiposit oluşumu, lipoprotein lipaz geni, apolipoproteinler ve peroxysomal reseptör histokimyasal kimlik ekspresyonunu doğruladı. Serumsuz ortam içinde TGF-b etkilenmiş aynı klon hücreleri, kondrosit homojen bir popülasyonu oluşturur. özelliği, kıkırdak hücre dışı matrisin çok katmanlı hücre kültürü proteoglikan ve kolajen tip II aşağıdakilerden oluşan geliştirdi. Aynı kültür stromal progenitör progenitör hücrelerin b-gliserofosfat oluşan% 10 cenin serumu etkisi farklılaşma sinyallerini kompleksi (, verici inorganik fosfat), askorbik asit ve deksametazon ile besin ortamı, hücre agregatlarının formasyonuna yol açar. Bu tür hücrelerde, hücre, hücre içi kalsiyum sürekli bir artış teyit kemik mineralizasyonu oluşumunu gösteren alkalin fosfataz ve osteopontin düzeyi aktivitesinde bir progresif artış vardır.

Bazı uygun, mezenkimal kök hücrelerinin yeteneği olarak sonsuza kadar bölünmeye ve plastisitenin yüksek derecede birlikte mezenkimal kökenli hücrelerin çeşitli üreme. Ventriküllere, veya beyaz madde mezenkimal kök hücrelerine uygulandığında sinir dokusunun parankimi göç ve nöronal veya glial kaynaklı bir hücre hattına farklılaşırlar. Buna ek olarak, in vitro ve in vivo olarak hematopoietik kök hücrelerin MSC transdiferansiyonun ilgili bilgi yoktur. Astrositler, oligodendrositler, nöronlar, kardiyomiyositler, yumuşak kas hücreleri ve çizgili kas hücreleri ayırt etme kabiliyeti açısından kendini göstermektedir MSC, olağanüstü yüksek süneklik belirlenen bazı çalışmalarda daha derinlemesine analizi. Bir dizi çalışma, in vitro ve in vivo olarak MSC potansiyelini transdifferentsirovochnogo kemik iliği kökenli multipotent mezenkimal hücreler, terminal olarak hücreli kemik, kıkırdak, kas, sinir ve adipoz dokusu oluşturan hatlar, hem de tendon ve hematopoez destekleyen stromasına ayırt bulundu .

Bununla birlikte, başka çalışmalarda, bir mezenkimal kök hücrelerin kısıtlama pluripotense genomunun işaretleri ve stromal progenitör hücre popülasyonlarının tespit edilememiştir ama birincil kültüründen izole 200'den MSC klonları araştırılmıştır mümkün pluripotent stromal hücreler ile kontrol edin. In vitro klonların büyük çoğunluğu osteojenik, kondrojenik ve adipojenik yöne ayırt kabiliyetlerini korur. Böbrek kapsülü altından veya yayılma odaları mezenkimal kök hücre transplantasyonu ile alıcı hücrelerin göç olasılığını hariç zaman in situ stromal progenitör hücreler bir bölge nakli kısıtlama faktörleri yokluğunun ya da tek başına pluripotent MSC olmadığını ya işaret heterojen fenotipi, muhafaza ortaya çıktı. Aynı zamanda yetişkin kök hücrelerin ortak öncüleri olan somatik pluripotent kök hücreleri, bir nadir görülen varlığını izin verdi.

Gerçek çok değil, pluripotent mezenkimal kök hücreler, kemik iliği hücrelerinin çok küçük bir bölümünü oluşturan ve belirli durumlarda, yetenekli üzerinde kemik, kıkırdak, yağ, kas dokusu hücrelerinin kendi neden olduğu soy ile kanıtlandığı gibi, zaman, in vitro kültürlenmiş, farklılaşma gelen çoğalmasına yol açar hematopoezleri destekleyen tenositlerde ve stromal elemanlarda olduğu gibi. Tipik haliyle, cenin buzağı serumu ile bir kültür ortamında sürekli maruz kalma adanmış projenitör hücrelerin stromal çıkış MSC kışkırtır, soy olan kendiliğinden nihai farklılaşmasını maruz kalır. Farklılaşma kombinasyonu deksametazon sinyal ve insülin adipositlerin oluşumu indükler, orta condition deksametazon, beta-gliserofosfat ve askorbik asit eklenerek yönlü osteoblast oluşumu elde edilmesi mümkün in vitro.

Kemik iliği MSC'lerin son farklılaşmanın safhasına giren belirli kültür koşulları oluşturmak için önce ilk olarak fibroblast benzeri mezenkimal kök hücrelerine dönüştürmek olduğu kurulmuştur. In vivo olarak, bu hücrelerin türevleri Kemik, kıkırdak, tendon, yağ ve kas dokusu oluşumu hem de stromal destek hematopoez tutulmuşlardır. Birçok yazar aslında MKH şekliyle "multipotent mezenkimal progenitör hücreler" anlamak ve kararlı stromal progenitör hücrelerin ve kemik iliği mezenkimal dokular. Kemik iliği kökenli mezenkimal çok potansiyelli progenitör hücrelerin klonal analizi için diğer klon hücreler ise, osteo, hondro- ve adipositlerde farklılaşmış klonların biraz fazla bir üçüncü osteojenik potansiyeli ve bir form yalnızca hondro- osteositler sahip olduğunu göstermiştir. Hematopoez destek osteoblastlar, kondrositler ve adic potsitov ancak stromal hücrelerin sadece bir fenotip ve fonksiyonel özelliklere sahip hücrelerin farklılaşmasını, uygun şartlar mikro altında RİA-9 multipotent mezenkimal hücrelerin bu klon,. Farklı fenotiplerin RCJ3.1 farklılaşmış mezenkimal hücreler, fetal fare kemik iliği hücrelerinden klon yalıtılmıştır. Bu klonun hücre elemanlarından askorbik asit, B-gliserofosfat, deksametazon birleşik etkisi ile ilk çok çekirdekli miyositleri oluşturulur ve daha sonra, arka arkaya, adipositler, kondrositler ve adacıklar, mineralize kemik edilir. , Osteo ve adipositler ve düz kas hücreleri farklılaşma işaretlerini ifade etmez, düşük bir proliferasyon oranı ile karakterize edilir ve hondro- oluşturulması için kültür koşulları farklılaşan sıçan fetus periostlarından granül hücre popülasyonu, kaydedilmemiş çok potansiyelli mezenkimal progenitör hücrelerin karşılık gelir.

Böylece, mezenkimal kök hücrelerin plyuri- veya genom multipotency sorusu dolayısıyla da tamamen yüklü değil stromal progenitör hücrelerin farklılaşması potansiyeli, sunumunu etkileyen, hala açık olduğunu kabul edilmelidir.

Mezenkimal kök hücrelerin deneysel olarak kanıtlanmış ve önemli bir özelliği, doku nişi bırakma ve genel kan dolaşımında dolaşabilme yetenekleridir. Farklılaşma genetik programını aktive etmek için, bu gibi dolaşımdaki kök hücreler uygun mikro çevreye düşmelidir. Farklı organların ve dokuların implante hücreleri olgunlaşmamış kan MSC alıcı hayvanlara sistemik olarak uygulandığında, daha sonra kan hücreleri, miyositler, adipositler, kondrositler, ve fibroblastlar ayrışmıştır gösterilmiştir. Sonuç olarak, yerel doku bölgelerinde kendilerine ve çevresindeki olgun hücreler arasında, hem de kararlı ve kararsız stromal progenitör hücrelerin Sinyal-düzenleyici etkileşim oluşur. Farklılaşma indüksiyon multipotansiyel mezenkimal progenitörlerinin mikro mekansal ve zamansal sağlamakla parakrin düzenleyici mezenşimal orijinli ve nemezenhimalnogo faktörleri (Büyüme Faktörleri, ikosanoitlerin, hücre dışı matris moleküller) gerçekleştirilir varsayılmaktadır. Bu nedenle, mezenkimal dokusunda lokal zarar multipotent mezenkimal hücreler fizyolojik süreçleri yerine onarıcı rejenerasyon meydana sağlam dokular içinde kompleks düzenleme sinyallerinin niteliksel farklılıklar bir mikro-bölgelerin oluşmasına yol açacaktır. Bu fark, hücre fenotipinin normal ve hasara bağlı bir mikro ortamdaki uzmanlaşması açısından son derece önemlidir.

Fikirlere göre, bilinen iki sürecin - fizyolojik rejenerasyon ve inflamatuar proliferasyon - temel fark mekanizmalarının ortaya çıktığı yer burasıdır. Bunların ilki, özel hücresel doku kompozisyonunun ve fonksiyonunun restorasyonu ile sona erer, buna karşılık proliferasyon işleminin sonucu, olgun bağ dokusu elemanlarının oluşumu ve hasarlı doku bölgesinin fonksiyon kaybıdır. Böylece, rejeneratif-plastik tıpta multipotent mezenkimal progenitör hücrelerin kullanımı için optimal programların geliştirilmesi için, mikro çevre faktörlerinin MSC'lerin farklılaşması üzerindeki etkisinin özelliklerinin dikkatli bir çalışması gereklidir.

Kök hücrelerin kompartmanının hücresel para- ve otokrin düzenleyiciler üzerindeki yapısının bağımlılığı dışsal sinyallerle modüle edilir, hiç kimse şüphe duymaz. Düzenleyici faktörlerin işlevleri arasında en önemlisi, MSC'lerin asimetrik bölünmesinin kontrolü ve komisyonun aşamalarını ve hücre bölünmesi sayısını belirleyen genlerin ifadesidir. MSC'nin daha da gelişmesine bağlı olan dış sinyaller, mikroçevreleri tarafından sağlanır. Adipositler hattı, miyofibroblastlar kan yoluyla stromal dokusunun, kıkırdak hücreleri, kemik içine ayırt yeteneğini muhafaza ederken, olgunlaşmamış MSC olarak, yeteri kadar uzun bir süre çoğalmasına yol açar. Bu genel dolaşımdan SB34-negatif stromal hücre elemanları dolaşan sınırlı nüfus kemik iliği stroma dokuya döndürülür olduğu bulunmuştur, bir hat CD34-pozitif hematopoietik kök hücreler içine transforme edilir. Bu gözlemler dokusunun kan dolaşımında devridaim progenitör mezenkimal hücreler olgunlaşmamış kemik iliği stromal hücrelerinin ortak havuz harekete geçirerek farklı organlardaki stromal kök hücrelerin dengesi için destek sağlar düşündürmektedir. Birden mezenkimal fenotip ve deney hayvanlarında adoptif transfer modeller ile gösterilmiştir in vivo olarak tamir veya kemik, kıkırdak, tendon ve adipoz doku rejenerasyonu katılmaları ile hücrelere MSC farklılaşması. Diğer yazarlara göre, MSC vasküler yatağın uzak göç yerel yer değiştirme veya korotkodistantnym çok potansiyelli mezenkimal hücrelerin doku içinde tamir kıkırdak de, kas rejenerasyonu ve diğer indirgeme reaksiyonları ile birleştirilir.

Yerel yedekler stromal doku temelleri fizyolojik doku rejenerasyonu süreçlerinde hücrelerin rol kaynağını oynamak ve harcama stromal doku kök kaynağı olarak uzak ulaşım MSC tarafından doldurulan kaynaklanıyor. Bununla birlikte, bu çoklu travma gibi hücresel onarıcı kapasitesi, acil harekete ihtiyacı olan rejenerasyon onarım işlemlerinde MSC tüm tren katılır ve kan yoluyla çevre kemik iliğinin mezenşimal öncül hücreleri dahil edildi.

Mezenkimal kök hücrelerin transplantasyonu

İntrauterin gelişme döneminde dokuların fizyolojik rejenerasyonu ve oluşumları arasında bazı paralellikler vardır. Insan ve memeli Embriyogenesis ecto, mezo ve endodermal mikrop katmanları havuzundan elde edilen özelleşmiş hücrelere çeşitli oluşumu, ama mezenkim zorunlu katılımı ile. Embriyonik mezenkimal dokunun gevşek hücresel ağı sayısız düzenleyici, metabolik, iskelet ve morfogenetik fonksiyonlar gerçekleştirir. Geçici organların tablolanması, yalnızca organogenesisin primer morfojenetik sinyallerini üreten progenitör hücrelerin klonojenik büyümesinden dolayı mezenşimin yoğunlaştırılmasından sonra gerçekleştirilir. Embriyonik mezenşimin stromal türevleri geçici organların hücresel bir çerçevesini oluşturur ve büyüyen birincil kan ve lenf damarları ile gelecekteki enerji kaynağı için temel oluşturur. Başka bir deyişle, fetal organların mikro dolaşım ünitesinin stromal elemanları yapısal fonksiyonel birimlerinin oluşmasından önce ortaya çıkar. Ek olarak, organojenez sırasında mezenkimal hücrelerin aktif göçü, homeotik Noch-Tep'lerin kısıtlanmasıyla hacim sınırlarının işaretlenmesi nedeniyle gelişen organların mekansal oryantasyonunu sağlar. Stromal iskelede, sıklıkla morfogenetik ve fonksiyonel olarak tamamen farklı hücreler içeren yapısal ve fonksiyonel parankimalöz organlar topluluğu bulunur. Sonuç olarak, embriyogenezde, mezenkimal fonksiyonlar birincildir ve progenitorial epitel hücrelerinin bölgesel proliferasyonunu ve farklılaşmasını aktive eden düzenleyici sinyaller üreterek gerçekleştirilir. Embriyonik mezenşim hücreleri, parankimal progenitör hücrelerin ilgili reseptörlere sahip olduğu LEG, HGF-b, CSF gibi büyüme faktörleri üretir. Yetişkin organizmanın olgun olgun dokusunda stromal hücre ağı ayrıca mezenkimal kaynaklı olmayan progenitör hücrelerin canlılığını ve proliferasyonunu korumak için sinyaller üretir. Bununla birlikte, postnatal spektrumu stromal düzenleyici sinyaller ontogenez diğer (SCF, HGF, IL-6, IL-1, IL-8, IL-11, IL-12, IL-14, IL-15, GM-CSF, flt-3, LIF, vb.) Ve hasarlı doku bölgelerinin fizyolojik rejenerasyonunu veya tamirini sağlamayı amaçlamaktadır. Ayrıca, her tür dokuda ve hatta aynı organ içinde stromal düzenleyici faktörlerin spektral özellikleri farklıdır. Hematopoietik ve bağışıklık sistemi hücrelerinin çoğalması ve farklılaşması için, özellikle, hematopoiez ve lenfopoiezis olarak, içinde hematopoietik ve lenfoid hücrelerinin olgunlaşması için koşulların sağlanması stromal mikro-hareket, belirli organ oluşur. Bu mikroçevresinin çoğalır ve mikro niş içine olgun vücudun yeniden doldurmak için hematopoetik ve lenfoid hücrelerin yeteneğine bağlıdır düzenleyici faktörlerin kalmıştır.

Multipotent mezenkimal hücreler üretmek dışı matrisin bileşenleri arasında, hücreler arası etkileşimi kuruluş ana bölümü ve kemik iliğinde, hücre dışı matris oluşumu alma fibronektin, laminin, kolajen ve proteoglikanlar gibi CD44 (hiyalüronik asit ve osteopontin reseptörü) not edilmelidir . Kemik iliği mezenkimal multipotent hücreler endüktif ve düzenleyici sinyaller sadece MSC, aynı zamanda hematopoetik öncüleri ve nemezenhimalnye kemik iliği kök hücreleri sağlayan redshestvenniki stromal mikroçevresinin yaratmak olduğu kanıtlanmıştır. Kabiliyetleri ile ölçülür hematopoez katılan MSC'ler aktif yönlendirme MSK sinyali hematopoietik kök hücrelerin doğrudan elde edilen, burada hematopoez destek stromal hücreleri, ayırt etmek bilinmektedir. Ağ stromal progenitör hücrelerin kültür bütün hematopoietik hücre klonlarının beslenme için temel oluşturur nedeni budur.

Olgun kan hücreleri ve çevre bağışıklık sistemi hücrelerinin "harcama" dinamik bir denge durumunda, hemodiyaliz ve lenfopoiezis olgun bir organizma yoğunluğu olarak. Kemik iliği stromal hücreleri ve lenfoid organlar nadiren güncellenen beri önemli yeniden yapılanma stromal yapılar içlerinde oluşmaz. Herhangi bir organ hemo veya lenfofoıez dinamik denge sistemi getirmek stroma yapıları organı şekilde hasar görmüş olarak değil, sadece açıklayıcıdır ve hematopoietik veya lenfoid hücrelerin çok fazla etkilemez ardışık değişiklikler aynı tip yol açan mekanik hasar yardımı ile mümkündür. Daha sonra hematopoietik veya immün hücreleri repopulating onarıcı yenilenmesi, oluşturulan stromal çerçevesinde sürecinde. Bu uzun bilinen bir gerçektir kan yapıcı organların stromal mikroçevresinin çalışmak için travma sonrası rejenerasyon uygun modeli yapar. Hızlı ve etkili bir şekilde dinamik bir denge durumundan hematopoietik doku getirmek için izin, kürtaj - Özellikle, kemik iliği onarıcı yenilenme araştırılması için, uzun kemiklerin medüller boşaltma mekanik kullanılır. Tibia kobayların medüller boşluğunun mekanik boşaltma sonrasında hematopoietik ve stromal, kemik iliği bileşenlerinin onarıcı yenilenme sürecini incelenirken göstergeler hematopoietik hücreler ve stromal hücrelerin rejenerasyon arasında (hematopoietik hücrelerin sayısı, konsantrasyon ve stromal progenitör hücrelerin miktarı) hiç bir doğrudan bağıntı olduğunu bulduk. Buna ek olarak, bu stromal progenitör hücrelerin popülasyonunda artış küretajla sonra erken bir tarihte etkisinin sağlandığı tespit edilmiştir ve kendi stroma ile ilgili fibroblastlar osteojenik doku özelliği olan, fosfatazopolozhitelnymi bulunmaktadır. Ayrıca kürtaj 3-5 uzun kemikler kobay sadece lenfopoetik organıdır bile dalak, kemik iliği hücre popülasyonunun büyüme ve ameliyat edilmemiş kemik, yol açtığı kurulmuştur.

Tibia kobaylar, genel olarak diğer türlere ait hayvanlar üzerinde yapılan deneylerde elde Literatür verilerine karşılık gelen kyuretirovannyh kemik iliğindeki morfolojik resim onarıcı işlemleri, hematopoetik doku çıkarılmasından sonra meydana gelen değişikliklere dinamikleri tüm türler için aynıdır ve fark sadece zaman parametreleri ile ilgilidir . Morfolojik medüller hematopoezin restorasyonu için iki fazlı bir kan pıhtısı oluşumu, kaba lif kemik organize ardışık işlemler olarak, erimesi, oluşumu ve ayrıca hematopoietik elemanları repopulating sinüzoidler retiküler stroma, gelişiminde boşaltılır. Hematopoietik kök hücrelerinin içeriğine paralel artış kemik iliği dokusu yenilenmesi işlemi artmaktadır hematopoietik progenitör hücre sayısı.

(2001) Gerasimov Yu ve arkadaşları, hematopoietik hücrelerin sayısında değişiklik ve rejenerasyon işleminin tek tek aşamaları stromal hücre öncülerinin miktarı karşılaştırılmıştır. Tedavi edilen kemikteki kemik iliği hücrelerindeki kantitatif değişikliklerin, rejenerasyonun morfolojik özelliklerinin dinamiklerine karşılık geldiği ortaya çıkmıştır. Regenerate yazarların hücre içeriğinin ilk üç gün boyunca Azaltma nedeniyle retiküler doku odakları osteoid ve küretaj ile damar hasarı oluşturmak üzere epifizinde kalan kemik iliğinde ve ikincisi yetişir yaratan mikro, olumsuz etkilerine hematopoetik hücrelerin kaybı bağlıyor. 7-12 inci gün yetiştirme yaderosoderzhaschih hücrelerin miyeloid hematopoietik stromal hücreler çoğalma bölgelerindeki tek odaklarının görünümü ile çakışmaktadır. 20. Gününde toplam hücre sayısında belirgin bir artış eşlik eder rejenere kemik iliği ve iyi gelişmiştir sinüslerde, önemli kısımları vardır. Bununla birlikte, bu dönemde hematopoetik elementlerin sayısı kontrol seviyesinin% 68'idir. Bu, daha önce yayınlanan verilerle, kürtajdan sonra hematopoietik hücrelerin sayısının, operasyondan sadece 35-40. Gün sonra norma ulaştığı ile tutarlıdır.

Travma sonrası erken dönemde, hemopoezisin restorasyonu için ana hücresel kaynak küretajda korunmuş hücresel elementlerdir. Daha sonraki dönemlerde, kemik iliği hematopoetik dokunun rejenerasyonunun ana kaynağı, serbest stromal bölgeleri tekrarlayan kök hücrelerdir. Stromal hücreler (endotel, retiküler ve osteojenik) belirli kategorilerde ile ilgili olarak, medüller kanal yeniden kendi eğitim kaynakları, açık kalır. Yu.V. Gerasimova ve arkadaşları, (2001) ise, normal kemik iliğinde önemli ölçüde daha yüksek koloni oluşturan fibroblastların kürtaj hücre konsantrasyonu sonra kalan kemik iliği kemikte. Yazarlar küretajı hematopoietik hücrelerin daha yoğun seçici elüsyonu olduğuna inanıyoruz stromal koloni stroma oluşumuna katılmaktadır ve daha kesin bir şekilde, hematopoietik hücrelerin daha temel madde ile bağlantılı oluşturan hücreler ile karşılaştırıldığında.

Koloniler fibroblastlar oluşturan hücrelerin sayısındaki değişiklikler dinamikleri osteogenez süreçlerinin yoğunluğu hematopoietik hücrelerin doldurmak sonraki trabeküler kemik yeniden soğurması ve formasyonu retiküler stroma ile ilişkilidir. Stromal progenitör hücrelerin çoğu, belirtilen rejenerasyon zamanlarında kaba lifli bir kemik dokusu ve retiküler bir stroma oluşturur. Yenilenme bölgesinde 5. Günde uzun osteosentez koşullarında femur kemik kırığı için bu sayı 6 kat artmıştır yoğun hücre konsantrasyonu ve koloni oluşturan fibroblastlar sayısını ve kemik oluşumunu arttırır. Fibroblast kolonilerini oluşturan kemik iliği hücrelerinin osteojenik özelliklere sahip olduğu bilinmektedir. Stromal progenitör hücrelerin sayısı, hematopoietik hücreler tarafından kortekslenmiş kemik iliği alanının kolonizasyonundan önce artar. Bu, stromal hücrelerin hematopoietik bir mikroçevrenin oluşmasını sağladığına dair kanıtlarla iyi bir uyum içindedir. Açıktır ki, hematopoietik mikro yaratılması stromal dokusunun rejenerasyonu için belirli bir seviyeye gelir, ve kan hücrelerinin uygun köprübaşı genişletme stromal üzerine hematopoietik hücrelerin sayısını artırır.

En büyük ilgiden yazarların verileri, kürtajdan hemen sonra iskeletin uzak bölgelerindeki stromal progenitör hücrelerin sayısının artmasıdır. Altıncı saat başlayarak, ve karşı tibia dahil yirminci gün fazla iki kat konsantrasyonları artış ve fibroblastların koloni oluşturan hücrelerin sayısında görülmektedir. Bu etkinin mekanizması muhtemelen eş zamanlı olarak platelet önemli sayıda ve koloni oluşturan hücrelerin çoğalmasına neden olduğu bilinen kan platelet türevli büyüme faktörü (RBSK) içine salınmasını yok ederken büyük kemik iliği travma kan pıhtılaşması çok sayıda oluşmasına yol açar gerçeği ile bağlanır proliferatif havuzun dışındaki vücutta bulunan fibroblastlar. Tavşanlar üzerinde deneylerde lokal uygulama MSC'ler kişiye MSC türetilen kondrositlerin oluşumu ile bağlantılı olabilir diz cerrahi hasar görmüş kıkırdak, restorasyon teşvik eder. Bununla birlikte, laboratuar sıçanlarında kemik defektlerinin onarıcı rejenerasyonu, bir seramik çerçevede kaplanmış mezenkimal kök hücrelerin kullanılmasıyla büyük ölçüde artmaktadır. Bu nedenle, eğer değil RBOK, daha sonra hasarlı stromal hücrelerinden elde edilen herhangi bir başka faktör, kemik iliğinin bozulmamış alanlarda mezenkimal progenitör hücrelerin çoğalması üzerinde uzak bir uyarıcı etkiye sahiptir ve kusur kemik iliği dokusunun alana geçişini uyarır varsayabiliriz. Buna karşılık, stromal hücreler hematopoietik hücreler farklı olarak mikro sorumlu olduğunu belirten önceki yıllarda literatür verilerine bu aykırı göç ve yerel kaynaklardan gelmek mümkün değildir.

Bununla birlikte, araştırmanın sonuçları Gerasimov Yu ve arkadaşları (2001) mekanik travma uygulama kyuretirovannoy kemik stromal dokusunun sadece keskin yeniden yapılanma neden olur, ancak stromada uzak kemiklerde de önemli bir değişiklik sağlam, yani sistemik tepki olduğunu göstermektedir lokal travma için stromal doku. Birden kürtaj - - politravma uygulandığında ve bu reaksiyon yükseltilir ve ameliyat kemik ve iskeletin uzak bölgelerinde değil, aynı zamanda lenfoid organların, özellikle dalak, sadece görülmektedir. Kemik iliği stromal dokusunun ve dalağın bu tür sistemik bir cevabın lokal travmaya ve politravmaya olan mekanizması bilinmemektedir. Bu sürecin, kemik iliğinin medüller kavitesinin mezenkimal stroması tarafından salınan humoral faktörün etkisi ile ilişkili olduğu varsayılmaktadır. Kemik iliği stromal hücreleri ve dalak yapma imkanı koloni oluşturma fibroblastlar Koloni kemik iliği tek katmanlı kültürler içerisinde aktivitesinin uyarılması ile ilgili verileri gösterir, hücre proliferasyonundan sorumlu hümoral faktörü organonespetsificheskogo.

Bu bağlamda, bu türevleri, kemik iliği, aynı zamanda diğer dokular sadece repopulating sistemik çok potansiyelli mezenkimal hücreler uygulandığında, bu gen tedavisi için, özellikle, kullanılan olduğunu belirtmek gerekmektedir. Bu belgede, mutant kolajen gen Donör hücreleri ile yabani tip farelere genomu ile MSC'lerin büyük miktarlarda intravenöz uygulama sonrası 9 aydır, 30 alıcı kemik ve kıkırdak doku hücrelerinin% ve IL-3, insan salgılayan transfekte mezenkimal kök fare hücreleri kadar kısmının yerini etkili bir bağışıklık yetersizliği olan farelere insan hematopoietik kök hücreleri ile aynı anda uygulanması durumunda hematopoez desteklemek.

trusted-source[3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10]

Mezenkimal kök hücrelerin genetik modifikasyonu

Genetik modifikasyon ek deneysel başarı nakilden 8 hafta boyunca kan antihemofilik faktör B görünümüne yol açar hücre transferi, ardından insan MSCs de MSC transfeksiyon Faktör IX geni immün yetmezliği olan fareler transfektanlar, not edilmelidir. Bu deneyde, transfekte hücrelerde faktör IX'un p-glutamil karboksilaz ile translasyon sonrası modifikasyonu gerçekleştirilmiştir. Bir retroviral vektör kodlayan insan faktör IX ile MSC nin transdüksiyonu, daha az başarılı olmuştur - sadece 12 gün boyunca normal yoğunluk pıhtılaşma hemostazı destekleyen faktör IX, terapötik bir seviyede hemofili köpek, bu hücrelerin daha sonra giriş.

Mezenkimal kök hücrelerin hayvanların beyin parankimi içine transplantasyonu, donör olgunlaşmamış hücrelerin hem nöronlar hem de glia popülasyonunda dönüştüğünü göstermiştir. Aşı nöronal türevleri sağlıklı verici mezenkimal doku teorik Gaucher hastalığı ve lipid metabolizması, karbonhidrat veya gangliosidler diğer bozuklukları olan hastalarda beyin metabolizmasının genetik anormalliklerin düzeltme mümkün kılar.

Sinir ve karaciğer dokusunda kemik iliği stromal öncü hücreler kök hücrelerin deneysel arama koşulları transdiferansiasyon devam edilmesi. Araştırmacıların dikkati farklılaşma indükleyicileri ve özel iklimlendirme medyasının kombinasyonlarına odaklanmıştır. Özellikle,% 10 fetal dana serumu, olan DMEM / F12 kültür ortamı (1/1) içinde yıkanan ve tekrar askıya kemik iliği stromal hücreleri ile primer kültür izole etmek için 200,000 / cm2 yoğunluğunda tohumlanır. 24 saat sonra, yapışık olmayan hücreler çıkarılır ve plastiğe bağlanan fibroblast benzeri hücreler bir hafta boyunca kültürlenir. Primer fare embriyonik fibroblastlar üç günlük kültür kültürlenmesi ile elde edilen, koşullu ortam kullanılan neuroblasts için kemik iliği stromal hücrelerin farklılaşması için, hem de% 2 cenin dana serumu ile DMEM / F12 (1/1) arasında ve 20 ng / ml ya da 10-6M LiF ile desteklenmiş retinoik asit (fare ve insan embriyonik kök hücrelerinin nöral farklılaşması için kullanılan nörokendüktörler). Hepatositlere progenitör hücreler, kemik iliği stromal hücrelerinin farklılaşma ortam,% 10 fetal dana serumu ile desteklenmiş DMEM / F12 (1/1) embriyonik fare karaciğer hücrelerinin birincil kültür kültür üç günlük bir sonucu olarak oluşturulan kıvamlandırılmış ortam uyarılmıştır.

Burada yine kemik iliği stromasının koloni oluşturan hücrelerinin heteromorfik olduğu ve iki tipe ayrılabileceğine dikkat edilmelidir. Birinci tip, büyük nükleuslu ve bir veya iki nükleol içeren filopodia hücrelerini oluşturan fibroblast benzeri hücreleri içerir. İkinci tip, iğ şeklindeki bir şeklin küçük hücreleri tarafından temsil edilir. Primer fare embriyonik fibroblastlar bir besleyici tabakası üzerinde elde edilen şartlandırılmış ortam içinde, hücre kültürünün her iki tipinde de, kültür hücreleri, Z-4-inci günde neuroblasts benzer görünür. Bu aşamada genellikle filopodia ile biten bir ya da iki uzun süreç ile iğ şeklindeki bir form vardır. Kısa dendritli piramidal veya stellat hücreleri daha az yaygındır. Dendrit büyüme meydana geldiği bir tat büyüme konileri filopodia ile - dendritler bir nöro tipik genişleme (böbrek büyümesi) ve distal kısmın, diğer dallanma vardır. Benzer morfolojik özellikler (böbrek büyüme konileri ve filopodia a) doğasında nöroblastom, nöronlar içinde farklılaşan, nörogenezin tarafından gazetelerde ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bu temelde, bazı yazarlar, kültürde tespit ettikleri hücrelerin nöroblast olduğu sonucuna varmışlardır. Özel olarak, her Z ve-4 gün şartlandırılmış ortam bir değiştirilebilir iki hafta kültüre stromal hücrelerin birincil kültürden sonra Schegelskaya E. Ve arkadaşları (2002), farklılaşmamış durum tutma, çoğalan hücrelerin bir kısmının bulundu. Dışa doğru, bu tür hücreler fibroblastlar gibi görünür ve farklılaşan nöroblastlar ile birlikte kültürde tanımlanmıştır. Hücrelerin çoğu (yaklaşık% 80), sinir dokusunun hücrelerine, esas olarak nöronlara farklılaşma aşamalarındaydı. Bu hücrelerin dendritik süreçleri birbiriyle yakın temasta bulundu, bu sayede hücreler, uzun çok hücreli iplikçikler halinde sinir ağının substrat bölümleri üzerinde oluşturuldu. Nöroblastların dendritik süreçleri, bazıları nöronun vücudunun uzunluğundan 8-10 kat daha fazla büyüdüler. Yavaş yavaş piramidal ve stellat hücrelerin oranı artmıştır. Yıldız şeklinde hücrelerin dendritleri dallandı. Yazarlara göre, piramit ve stellat hücrelerinin daha sonra iğ şekilli olanlara göre farklılaşması, hayvanlarda normal nörojenezin aşamalarına karşılık gelir. Sonuç olarak, araştırmacılar, kemik iliği stromal hücreleri, kök hücreler, nöron neden maruz kaldığı sonucuna nöronların üç ana tür in vitro üretilen neuroblasts olarak bu işlem de. Sinir hücrelerinin öncelikleri de, kemik iliği stroma hücrelerinin 3-4 gün süreyle% 2 fetal serum ve 20 ng / ml LİF ile ortamda yetiştirilmesi sırasında tespit edilmiştir. Ancak bu durumda kök hücreler çok yavaş ayrıldı, nöroblastların farklılaşması sadece vakaların% 30'unda meydana geldi ve nöral ağlar oluşturmadılar. Astrositler ve oligodendrosit - sinir hücresi farklılaşma indükleyicileri retinoik asit, glial hücreler bir ağırlığı ile sinir hücrelerinin% 25-30 bir kültüründe elde edilen yazar olarak kullanılması. Nöronlar, tüm üç tip tarafından temsil edilmelerine rağmen, tüm sinir hücrelerinin sadece üçte birini oluşturdu: fusiform, piramidal ve stellat hücreleri. Piramidal nöronlar bireysel aksonları, normal neuroontogenesis dendritik süreçlerin daha oluşumu görünür bulundu ise retinoik asit ortamı sinir hücrelerinde kültür stromal hücrelerin 6. Günde, daha fazla değişmiş oldu. Astrositler ve oligodendrositlerin ve akson ve dendritlerin büyüme sırasında besleme işlevlerini yapmaktadır ve normal sinir dokusu oluşumu için gerekli olan myelinating: yazarlara göre, sinir hücrelerinin düşük verim rağmen, retinoik asit indükleme yöntemi avantajları vardır. Bu nedenle, hasarlı bölgeleri in vivo tamir etmek için, glial hücrelerle zenginleştirilmiş nöronların bir süspansiyonunu kullanmak daha iyidir.

İkinci deney dizisinde, yazarlar kemik iliği stromal hücrelerinin karaciğer hücrelerine farklılaşmasını sağlamaya çalışmışlardır. Fare embriyonik hepatositleri inkübe ederek elde şartlandırılmış ortam içinde kemik iliği stromal kök hücrelerin üç günlük kültürden sonra, olarak büyük, küresel şekilli hücreleri, farklı boyutlara sahip, genellikle, iki çekirdek, sitoplazmik inklüzyonlar bulunmuştur. Bu hücreler farklılaşma farklı aşamalarında ve sitoplazmada büyüklük, çekirdek sayısı ve inklüzyonlar farklıydı. Bu hücrelerin çoğunda, yazarların kendilerini hepatositlerin progenitör hücreleri olarak tanımladıkları glikojen tespit edilmiştir. Kültür yana bir hücreler, embriyonik hepatositlerin kültür edilmesiyle elde edilen şartlandırılmış ortam içinde, sinir hücrelerinin farklılaşması bir faktörler vardır ve, tersine, hepatositlerin projenitör hücrelerine kemik iliği stromal hücrelerinin farklılaşmasını teşvik faktörler vardır Sonuç, ardından neuroblasts benzer saptandı . Bunlar belirli şartlandırılmış ortam, ve endüktans bağlı olarak karaciğer veya nöral doku hücrelerine in vitro olarak ayırt olarak yazar, kemik iliği stroma pluripotent hücrelerin varlığını düşündürmektedir.

Bazı çalışmalarda, kemik iliği stroma hücrelerinin kardiyomiyositler, kıkırdak, kemik ve sinir doku hücrelerine farklılaşması gerçekten doğru bir şekilde gösterilmiştir. Kemik iliği hücreleri arasında, hepatositlere farklılaşabilen kök hücre popülasyonları olduğu bilgisi vardır. Farelerde deney yukarıda Bu sonuçların ışığında, yetişkinlere organizmanın çeşitli dokuların hücrelerine dönüştürmek için özelliğine sahip olan kemik iliği pluripotent mezenkimal kök hücrelerinde varlığının başka bir onay olarak kabul edilebilir.

Mezenkimal kök hücrelerin transplantasyonu

Insan mezenkimal kök hücrelerin klinik naklinde hematopoetik kök hücrelerin genişlemesi için kullanılan ve bunların erken torunları prekommitirovannyh edilebilir. Özellikle, ile kemoterapi sonrası otolog hematopoietik kök hücreler ve MSC kanser hastalarının giriş periferik kanda nötrofiller ve trombositlerde iyileşmeyi yüksek hızlandırır. Otolog ve çoklu miyelom, aplastik anemi, kendiliğinden trombositopeni tedavisinde kullanılan mezenkimal kök hücrelerin allojenik transplantasyon - Birincil kusur hematopoietik stromal dokusunun ile bağlantılı hastalıkları. Yukarıda pek çok durumda hematolojik patolojilerde hücre terapisi etkinliği gelmesi nedeniyle, seçici olmayan tahribat, bölgesel ve dolaşımdaki kanser hücrelerine ölüm sayısında bir ameliyat sonrası iyileşme süresi, kan azalması, azalma ortaya stromal ve hemopoietik kök hücrelerinin giriş, ki burada kalıp ve kendi progenitör hematopoietik hasta hücreleri. Beklenen terapötik genin kültür ve transfeksiyon kemik iliği aspiratları, genişleme elde göreceli kolaylığı klinik uygulamada uygulamaları ve diğer çok potansiyelli mezenkimal hücrelerin sözü MSC. Yerel doku defektleri çok potansiyelli mezenkimal hücrelerin ve mezenkimal kökenli dokuların sistemik disfonksiyon yerel implantasyonu kullanabilir için Böylece genel sirkülasyon içine giriş dahil değildir telafi etmek.

Onların argümanları lokal, sistemik nakli ve gen terapisi için MSC'lerin perspektifler biyoloji stromal hücrelerin açısından analiz edildiği eserlerin yazarları Daha temkinli. Postnatal kemik iliği geleneksel olarak açıkça ifade edilen iki hücre hattından oluşan bir organ olarak kabul edilir - gerçek hematopoetik doku ve ilişkili destek stroması. Bu nedenle, kemik iliği mezenkimal kök hücreleri başlangıçta yalnızca düzenleyici faktörlerin üretimi hematopoetik mikroçevresinin için stromal bazında kaynağı olarak gördüler. Daha sonra araştırmacıların dikkati, MSC'nin iskelet dokularının bir kök kaynağı olarak rolünü incelemeye geçti. Son veriler, kemik iliği stromal hücrelerinin, nöral veya kas dokusunun oluşumu ile beklenmedik bir farklılaşma potansiyeli olduğunu göstermektedir. Diğer bir deyişle, mezenkimal kök hücreler transgermalnuyu plastisite sergiler - hücre tipleri fenotipik olarak orijinal olmayan doku hücreleri ayırt etmek yeteneği. Ancak, kemik iliği stromal hücrelerinin biyolojisi bazı yönleri genel biyolojik planında belirsiz ve çözümlenmemiş kalır ve kimlik, doğa, köken ve gelişim ve fonksiyon in vivo kemik iliği stromal hücrelerinde hem de müsaade potansiyel farklılaşma ex vivo ve olasılığı dahil olmak üzere bazı ayrıntılı olarak in vivo terapötik kullanım. MSC'lerin potansiyel fırsatlar ilişkin veriler, hem de biyoloji kurulan dogma kesin bir zıtlık kök hücrelerin, diğer rejeneratif potansiyelinin çalışmaların sonuçları.

Düşük yoğunluklu koşullar altında kültürlendiğinde, kemik iliği sapı stromal hücreleri, her biri tek bir öncü hücrenin bir türevi olan ayrı koloniler oluşturur. Çekirdekler oluşturma yeteneği ile belirlenen çekirdekli kemik iliği hücrelerindeki stromal progenitör hücrelerin yüzdesi, hem kültivasyon koşullarına hem de MSC'ye ait türlere önemli ölçüde bağlıdır. Mezenkimal kök hücrelerin etkinliğini oluşturan koloni besleyici bağımsızdır, veya kültür ortamından Örneğin, stromal progenitör hücrelerin maksimum miktarını elde etmek için kemirgen, kemik iliği hücreleri ve serum ışınlanmış besleyici bir kültürün bulunduğu ortamda mutlaka gereklidir. Stromal progenitör hücrelerin proliferasyonunu stimüle eden bilinen mitojenik faktörlerin sayısı sınırlıdır. Bunlar PDGF, EGF, FGF, TGF-b ve ayrıca IGF1 içerir. Optimal kültür koşulları altında, MSC'nin poliklonal çizgileri in vitro olarak 50'den fazla hücre bölünmesinden kurtulur, bu da 1 ml aspirattan milyarlarca kemik iliği stromal hücresi elde edilmesini mümkün kılar.

Bununla birlikte, kemik iliği stromal hücre popülasyonu da farklı hızlarda oluşumu ve büyük düz hücrelere fibroblast benzeri milin aralığını kapsamaktadır, hücre morfolojisi, çeşitli koloni büyüklüğü değişkenlik olarak kendini gösterir ki heterojendir. Bu tür bitkilerin 20 gün sonra gelişmesiyle fenotipik heterojenite de dikkati çekmektedir. Koloninin kısmı alkalin fosfataz yüksek ekspresyonu ile karakterize edilir, diğerleri ifade etmez, ve üçüncü tipi koloni çevresi üzerinde merkezi bölge ve fosfatazonegativnymi içinde fosfatazopozitivnymi bulunmaktadır. Ayrı koloniler, kemik dokusunun nodüllerini oluştururlar (matris cevherleşmesinin başlangıcı, alizarin kırmızı veya kalsiyumda Van-Koss ile lekelendiğinde işaretlenir). Diğer kolonilerde, yağ lekesi, G-lekelemesiyle kırmızı ile tanımlanır. Daha az sıklıkla mezenkimal kök hücrelerin kolonileri, alcyan mavisi ile renklendirilmiş kıkırdaklar oluştururlar.

Deney hayvanlarında ektopik naklinden sonra poliklonal MGK hatları kıkırdak dokusu ile, hem de, ancak nadiren, myelopoiesis ve adipositler ilişkili setchatoobraznoy ektopik kemik stroma oluşturur. Hematopoietik ve damar sisteminin hücre çizgileri alıcıdan elde edilir, oysa de novo oluşmuş kemik dokusu kemik hücrelerinin ıçerır bazı durumlarda kimerizmi kemik iliği stromal hücrelerinin monoklonal hatları transplantasyonu olarak, adipositler, stroma ve verici kökenli içerir.

Bu çalışmaların sonuçları, klonal çizginin elde edildiği stromal kemik iliği öncüsünün gövde yapısını doğrulamaktadır. Aynı zamanda, eşzamanlı olarak, kültür hücrelerindeki tüm klonlamaların gerçekten çok hücreli kök hücreler olmadığını da gösterirler. Bireysel klonların bir farklılaşma gerçek bir potansiyel en doğru bilgiler, transplantasyondan sonra yerine in vitro bunların türevlerinin fenotipini belirleyen in vivo olarak elde edilebilir, bazı araştırmacılar inanıyoruz ve onların görüş paylaşırlar. Osteo kültür fenotipik işaretleyiciler ekspresyon hondro- veya adipogenesis (histokimyasal teknikler mRNA veya ile belirlenir) ve daha da mineralize matris üretimi in vivo pluripotense tek klon derecesinin yansıtmaz. Bu nedenle, stromal hücre grubundaki kök hücrelerin tanımlanması, biyolojik transplantasyon testinin uygun koşulları altında sadece posteriori olabilir. Kıkırdak oluşumu, yayılma odaları olarak veya in vitro olarak stromal hücrelerin mikromassnyh kültürlerinde kapalı sistemlerde, nadir değildir oysa Özellikle, çok seyrek olarak, transplantasyon açık sistemlerde görülen kondrojenez, lokal olarak düşük oksijen gerilimi elde olup, kıkırdak oluşumuna katkıda bulunmaktadır. Bu nedenle, transplantasyon tekniği ve spesifik olmayan in vitro kültürleme koşulları bile MSC farklılaşmasının çeşitliliğini önemli ölçüde etkiler.

Verilen deney koşullarının gözlenerek deneysel transplantasyon, kemik iliği stromal hücrelerinin farklılaşması ve bunların doğru bir şekilde tanımlanmasının kilit unsurunun belirlenmesi için altın standarttır. Tarihsel olarak, kemik iliği stromal kemik iliği transplantasyonu çalışmaları, yaygın bir kemik iliği transplantasyonu problemiyle ilişkilidir. Kemik iliği stromal hücrelerinin transplantasyonu ile hemopoietik mikroçevrenin oluşturulduğu ve transplantasyon bölgesinde ektopik hemopoetik doku gelişimi sağladığı saptanmıştır. Vericiden alınan mikroçevrenin ve hematopoietik dokunun kaynağı, konakçıdan ektopik kemiği gerçek "ters" kemik iliği transplantasyonu olarak tedavi etmemizi sağlar. Kemik iliği stromal hücrelerinin lokal transplantasyonu, spontan onarıcı rejenerasyondan daha belirgin olan kemik defektlerinin etkili bir şekilde düzeltilmesini sağlar. Hayvan modellerinde çeşitli klinik öncesi çalışmalarda inandırıcı bile en basit durumlarda, bu yöntemleri optimize etmek rağmen, ortopedi kemik iliği stromal hücrelerinin nakli olasılığını kanıtladı en dikkatli çalışma ve analiz gerektirir. Osteojenik stromal hücreler henüz ayarlanmamış genişleme ex vivo olarak özellikle, uygun koşullar altında, hiçbir egzoz yapısı ve bileşimi ideal bir taşıyıcı madde ve kemik hacmi rejenerasyonu için ihtiyaç duyulan hücre sayısı bulunmaktadır.

Mezenkimal kökenli alışılmışın dışında süneklik MSC doku rejenerasyonu için yayılır ex vivo olarak kemik iliği stromal hücreler uygulanması ek olarak sinir hücrelerinin yenilenmesi veya CNS'de gen ürünlerinin verilmesi için potansiyel kullanımı açılır. Prensip olarak, bu, sinir sisteminin yenilgisinde hücresel terapiyi basitleştirir, çünkü insanlardan otolog nöral kök hücrelerin elde edilmesine gerek yoktur. Kardiyomiyositlerin ve myojenik prekürsör hücrelerin üretimi için kemik iliği hücrelerinin gerçek bir stromal ve ekstrinsik orijin olarak kullanılma olasılıkları bildirilmiştir.

Yaygın iskelet hastalıklarının tedavisi için kemik iliği stromal hücrelerinin sistemik transplantasyonu üzerine deneyler devam etmektedir. Kemik iliği stromal hücreleri de deney hayvanlarında patolojik kemik dokusu oluşumuna yol açar hücrelerin genetik bilgiler kullanılarak vektör transferi ile gösterilmiş olup, iskelet hastalıkları genetik bozukluklar sorumlu nüfus olduğunu kuşkusuz. Bununla birlikte, genel kan akışına sokulduktan sonra stromal hücrelerin iskeletin kemiklerinde implant, büyüme, çoğalma ve farklılaşma yeteneği henüz kanıtlanmamıştır.

Bu kemik iliği stroma standart prosedür başarılı bütünleşmesini değerlendirmek için, hematopoetik doku ile çok sıkı kriterleri nakli olmadığı gerçeğine nedeni kısmen sistematik stromal hücreler geliştirilecek henüz uygulamaya dayanır. Doku ekstraktlarındaki markör genlerin varlığının veya donör orijinli hücrelerin kültüründeki izolasyonun hücrelerin aşılanmasıyla değil, sadece hayatta kalmalarıyla ilgili olduğunu hatırlatmak gerekir. Fare bacak kemik iliği stromal hücrelerinin bile intra-arteriyel enjeksiyon verici türetilmiş hücreler mikrovasküler kemik iliği ağı içinde çok sayıda bulunduğu gerçeğine rağmen, hemen hemen sıfır sonuç engraftment yol açabilir. Ne yazık ki, bu tür hücreler genellikle, sadece in vivo kültür koşulları altında marker donör genlerinin belirlenmesinin sonuçları temelinde "aşılanmış" olarak tarif edilir. Ayrıca, farklı ve fonksiyonel olarak aktif donör orijinli hücrelerin dokularında uzun süreli entegrasyonun ikna edici kanıtını sağlamak gereklidir. İskelet içindeki kemik iliği stromal hücrelerinin aşılanması ile ilgili bildirildiği birçok yayınlanmış çalışmada, bu türden net veri eksikliği dikkat çekicidir. Yine de, hayvanlar üzerinde yapılan bazı doğru deneylerde, sistemik uygulamalarından sonra stromal progenitör hücrelerin sınırlı ama gerçek bir şekilde aşılanmasının sağlandığı belirtilmelidir.

Bu veriler, miyojenik kemik iliği prekürsör hücrelerinin vasküler sistem yoluyla kaslara verilmesi olasılığının araştırmanın sonuçları ile tutarlıdır. Bununla birlikte, hem iskelet hem de kas dokularının, kanda dolaşımı içermeyen göç süreçlerini kullanan ekstravasküler hücre hareketleri temelinde gelişim ve büyüme sırasında oluştuğu unutulmamalıdır. Eğer prekürsör hücrelerin katı faz dokularına iletilmesi için bağımsız bir dolaşım yolu gerçekten varsa, fizyolojik olarak dolaşan mezenkimal progenitör hücrelerin varlığına izin vermek mümkün mü? Hem gelişmekte olan hem de postnatal organizmada bu hücrelerin kaynağı nedir ve damar duvarına nasıl nüfuz ederler? Bu sorunların çözümü kesinlikle gereklidir ve en kapsamlı preklinik analiz gerektirir. Bu soruların cevaplarının bulunmasından sonra bile, iskelet büyümesi ve bağ dokusunun yeniden biçimlenmesi ile ilişkili problematik kinetik özellikler çözümsüz kalmaktadır. Aynı zamanda, mutasyona uğramış iskelet progenitör hücrelerin tüm popülasyonunu sağlıklı stromal hücrelerle değiştirerek osteojenez bozukluklarının tedavisi gerçek bir klinik perspektif gibi görünmektedir. Bu durumda, patolojik osteogenezise bağlı kırılma veya deformasyonun lokal zonları ve kemik dokusunda yıkıcı değişiklikler, kültürlenmiş in vitro stromal kök hücreler tarafından düzeltilebilir. Bu nedenle, gelecekteki araştırmaların yönü, ex vivo otolog mutasyona uğramış osteojenik progenitör hücrelerin transformasyon veya genetik düzeltme sorunları üzerinde odaklanmalıdır.

Geçici ya da kalıcı olarak hücreler, genetik mühendisliği, hücre ve moleküler biyoloji, nitro maddeler ve in vivo hücre metabolizma içinde bireysel protein rolü ile ilgili pek çok bilimsel bulgular kaynağı temelini oluşturdu. Stromal kemik iliği kök hücrelerinin özellikleri iskeletin genetik hastalıkların düzeltilmesi için benzersiz devreleri nakli geliştirmek için izin yana kalıtsal hastalıklar ve insan hastalıkları doğru moleküler tekniklerinin kullanılması, pratik ilaç için umut vermektedir. Bu durumda, mezenkimal öncü hücreler gelecek alıcıdan oldukça kolay elde edilebilir, bunlar genetik manipülasyon için uygun ve kısa bir süre içinde çok sayıda doğurmak edebiliyoruz. Mezenkimal kök hücrelerin kullanımı, genetik bilgi materyalinin doğrudan vtruvous vektör yapıları aracılığıyla hastaya iletilmesiyle ilişkili sınırlamalar ve riskleri önler. Bu strateji, pi, embriyonik kök hücreler için geçerli olmakla birlikte, doğum sonrası otolog kemik iliği stromal hücreleri - tercih edilen bir malzeme, kendi uygulama mümkün immünolojik transplantasyon sonrası komplikasyonlar hariç tutar. Kemik rejenerasyonu hızlandırmak için, örneğin, kısa vadeli etkisi elde etmek için, en iyi yöntem elektroporatsrsh, kimyasal füzyon, lipofeksiyon, plasmidler ve adenoviral yapılar tarafından genetik modifikasyon mezenkimal kök hücreleridir. Özellikle, kemik iliği stromal BMP-2 hücrelerine viral transfeksiyon, deneysel politravmada kemiklerin rejenerasyonunu hızlandırmada etkili olmuştur. Toksisitenin olmaması nedeniyle adenoviral vektör yapılarının oluşturulması tercih edilir. Bununla birlikte, bu durumda kemik iliği stromal hücrelerinin genetik modifikasyonu, son derece düşük stabilite ile karakterize edilir. Ayrıca, normal bir dönüştürülmüş kemik iliği stromal hücreleri önemli ölçüde transfekte edilmiş hücrelerin ölümü yüzdesi artar diğer hücre tiplerine göre 10 kat daha fazla enfeksiyon yapıcı genetik bilgilerin, vektör taşıyıcıların kullanılmasını gerektirir.

Belirli genlerin adeno-bağlantılı virüsler, retrovirüsler arasında lentivirüs ve adeno-retroviral kimera kullanılmasını gerektirir mezenkimal kök hücrelerin gerekli uzun süreli veya sürekli bir değişiklik, düşük ya da sıfır biyolojik aktivitesinin neden olduğu resesif hastalıkların tedavisi için. Bu virüslerin nakil alanları, büyük DNA transfectleri taşıyabilmektedir (8 kb'ye kadar). Bilimsel literatürde daha önce ekzojen kemik iliği stromal, retroviral konstruktların düzenleyici moleküllerin sentezi kodlayan DNA ile transfekte edilmiş hücrelerin ve işaretlerin biyolojik etkinliği hakkında bilgi ortaya çıkmıştır - IL-3, CD2, faktör VIII ve L-DOPA sentezinde yer alan enzimler. Ancak bu çalışmalarda yazarlar, bu teknolojinin pratik uygulaması başlamadan önce aşılması gereken bir takım sınırlamalara işaret ediyorlar. İlk problem, MCK ex vivo modifikasyon işlemini optimize etmektir. Kemik iliği stromal hücrelerinin uzun süreli (3-4 hafta) proliferasyonunun in vitro transfeksiyonunu azalttığı bilinmektedir. Aynı zamanda, MSC'lerin yüksek düzeyde genetik modifikasyonunu elde etmek için birkaç transfüzyon döngüsü gereklidir. İkinci problem, henüz dört ayı aşmayan terapötik genin ekspresyon süresi ile ilgilidir. Etkili gen ifadesinde doğal bir düşüş, promoterlerin inaktivasyonundan ve modifiye hücrelerin ölümüne bağlıdır. Mezenkimal kök hücreleri kullanılarak genetik bilgilerin genel umutları transferi olarak ön çalışmaların sonuçları doğru yönde biyolojik aktiviteyi düzenleyen yeterli bir promoterin, transfeksiyon yöntemleri ex vivo daha optimizasyonu için gerekliliğine işaret etmektedir ve modifiye kemik iliği stromal hücrelerinin yeteneğini geliştirmek naklinden sonra in vivo kendini yenilemek. Kemik iliği stromal hücrelerini doğru yönde değiştirmek için retroviral tasarımların kullanımının her zaman zorunlu aşılamayı gerektirmediğine dikkat edilmelidir. Transfekte edilmiş mezenkimal kök hücreler, stabil ikametin bir arka planına karşı ve zorunlu aktif fiziksel birleşmeye ve bağ dokusunda işlev görmeden bir düzeltme işlevini yerine getirebilir. Bu durumda, genetik patolojinin tezahürünü belirleyen açığı in vivo faktör üreten bir biyolojik mini pompa olarak düşünülmelidir.

Durumda, bozuk genetik bilginin aktarılması veya satışı ile bloke edilmesi gerekir, çünkü bir gen ya da anormal patolojik biyolojik aktivitesinin ekspresyonu ile karakterize edilir baskın genetik hastalık tedavisi için dönüştürülmüş kemik iliği stromal hücreleri kullanımı çok daha problemlidir. Genetik mühendisliğinin yöntemlerinden biri, transgenik hayvanlar yaratmak için embriyonik kök hücrelerin homolog yeniden birleştirilmesidir. Ancak, tanımlama, ayırma ve bu tür Rekombinantların genişleme sorunlarla birleştiğinde homolog rekombinant çok düşük seviyede, yakın gelecekte bu tekniğin yaygın kullanımını teşvik etmek olası değildir hatta yeni teknolojik yöntemlerin geliştirilmesine eğer. Genetik mutasyonlar istenen dizinin (kısa DNA oligonükleotitler, veya kimerik RNA / DNA oligonükleotitleri) hasar görmüş genomunda homologları için bu bağlama ile, ekzojen DNA'nın getirilmesi suretiyle düzeltilebilir gen terapisine ikinci bir yaklaşım, hasarlı DNA baskın patoloji otomatik düzeltme dayanır. Üçüncü düzenleme, transkripsiyonu uyarımı imkanı hariç üçlü sarmal yapı oluşturmak üzere belirli bir gene bağlanan özel olarak tasarlanmış oligonükleotit kullanılması ile elde edilir patolojik bilgi iletim kilit sağlar.

Genom düzeyde genetik hastalıkların düzeltme uygun ve tercih edilen bir tedavi yöntemi olmasına rağmen, mRNA'nın da bir baskın negatif gen bloke edilmesi için umut verici bir vektör (belki de daha erişilebilir) 'dir. Çeviri ve / veya artan mRNA bozulmasını inhibe etmek için uzun protein molekülleri antisens oligonükleotid dizileri veya hücre mRNA biyosentetik düzeneğin bağlanması, tam blokajı ile kullanılmıştır. Ek olarak, çift zincirli RNA, mekanizmasının net olmadığı halde mRNA'nın hızlı bozunmasını indükler. Bununla birlikte, kısa ya da tek mutasyonları olan bir mutant aleli transkribe edilen mRNA'nın sadece çıkarılması, normal alel mRNA ekspresyonunu destekleyen pek de olası değildir. Alternatif bir kullanım ribozinov çekiç ve keskin olduğunu, çeviri sırasında bölünme ve inaktivasyonu daha sonra indüksiyon ile mRNA'nın yüksek düzeyde spesifik bölgelerine bağlanma yeteneğine sahiptir. Günümüzde patolojik osteogenez tedavisinde bu yöntemin kullanılması olasılığı incelenmektedir. Ne olursa olsun kesinlikle hedef ne - yeni gen terapisi teknoloji genomik veya sitoplazmik elemanlar başarılı kemik iliği stromal hücrelerinin ex vivo olarak, belli bir vektör ve istenen in vivo faktörleri ifade mezenkimal kök hücrelerinin kararlı yeteneği uygun bir seçim reaktifler dahil verimliliğini tarafından belirlenecektir.

Böylece, mezenkimal kök hücrelerin beklenmedik özellikleri ile keşfi, hücre çizgilerinin gelişimi için yeni bir kavramsal şema oluşturur. Ama stromal kök hücrelerinin biyolojik rolünü anlamak için, doğaları transdiferansiyonun veya farklılaşmanın giderilmesi yeteneğine sahip, kendi embriyonik gelişim, doğum sonrası büyüme, olgunlaşma ve yaşlanma sürecinde fizyolojik önemi, hem de insan hastalıkları daha da disiplinler arası araştırmalar gerektirmektedir.

Translation Disclaimer: For the convenience of users of the iLive portal this article has been translated into the current language, but has not yet been verified by a native speaker who has the necessary qualifications for this. In this regard, we warn you that the translation of this article may be incorrect, may contain lexical, syntactic and grammatical errors.

You are reporting a typo in the following text:
Simply click the "Send typo report" button to complete the report. You can also include a comment.