Kısıtlama fragman uzunluğu polimorfizminin analizi

Kromozomal DNA analizi için çeşitli kısıtlama endonükleazlarının geniş kullanımı, insan genomunda büyük bir değişkenliği ortaya çıkarmıştır. Kodlama ve yapısal genlerin düzenleyici bölgelerin küçük değişiklikler belirli bir protein sentezi sona ermesi ya da genellikle hastanın fenotiplerini de etkilemektedir insan vücudunda kendi fonksiyon kaybına yol açabilir. Bununla birlikte, insan genomunun yaklaşık olarak% 90 daha fazla uçucu olan ve nötral mutasyonları ya da polimorfizmlerin çok sayıda sağlar ve herhangi bir fenotipik ifadesini sahip kodlamayan diziler de oluşur. Bu tür polimorfik bölgeler (lokuslar) kalıtsal hastalıkların teşhisinde genetik belirteçler olarak kullanılır. Polimorfik lokuslar tüm kromozomlarda bulunur ve genin spesifik bir bölgesine bağlanır. Polimorfik lokusun lokalizasyonunu belirledikten sonra, hastaya hastalığa neden olan bir mutasyonun hangi genomla ilişkili olduğunu tespit etmek mümkündür.

DNA'nın polimorfik bölgelerini izole etmek için, bakteriyel enzimler kullanılır - kısıtlama enzimleri, ürünleri kısıtlama bölgeleridir. Polimorfik bölgelerde meydana gelen kendiliğinden oluşan mutasyonlar, onları belirli bir kısıtlama enziminin hareketine karşı dirençli veya tersine duyarlı hale getirir.

Kısıtlama bölgelerindeki mutasyonel değişkenlik, kısıtlı DNA fragmanlarının uzunluğunun değiştirilmesi, bunların elektroforez ve ardından spesifik DNA probları ile hibridizasyon kullanılarak ayrılmasıyla tespit edilebilir. Bir polimorfik alanda kısıtlamanın yokluğunda, elektroforgramlarda bir büyük parça tespit edilecek ve mevcut ise daha küçük bir parça bulunacaktır. Homolog kromozomların özdeş lokuslarında bir restriksiyon mevkisinin varlığı veya yokluğu, mutant ve normal geni güvenilir bir şekilde etiketlemeyi ve aktarımını yavruya kadar takip etmeyi mümkün kılar. Bu nedenle, hastaların DNA'sının çalışmasında, polimorfik bölgede bir kısıtlama bölgesi bulunan her iki kromozomda, elektroforgramda kısa DNA fragmanları ortaya çıkacaktır. Polimorfik bir kısıtlama bölgesini değiştiren bir mutasyon için homozigot olan hastalarda, daha uzun uzunluktaki fragmanlar tespit edilecek ve heterozigöz fragmanlarda kısa ve uzun fragmanlar tanımlanacaktır.